Санация хлоргексидином влагалища во время родов для профилактики ранних инфекций новорожденных, вызванных стрептококками группы B

Нет доказательств того, что обработка влагалища антибактериальной жидкостью — хлоргексидином или использование геля хлоргексидина во время родов уменьшает частоту инфекций, вызванных β-гемолитическим стрептококком группы B, у детей.

В норме влагалище женщины содержит многочисленные бактерии, которые, в целом, не вызывают каких-либо проблем ни для женщины, ни для её ребенка. Однако, иногда во время рождения/родов ребенок подхватывает инфекцию. Стрептококковая инфекция (группы В) может вызвать тяжелое заболевание у детей, а в редких случаях в результате инфекции ребенок может умереть. В этом систематическом обзоре в качестве возможного способа уменьшения инфекций было изучено промывание влагалища хлоргексидином, или применение геля или крема хлоргексидина во время родов. В этот обзор четырех испытаний включены женщины, у которых влагалище или прямая кишка были колонизированы стрептококком группы В, и 1125 их недоношенных и доношенных детей. В обзоре показано, что, хотя хлоргексидин может снизить число бактерий, которые переходят от матерей к младенцам во время того, как младенцы проходят через родовые пути, или если они заглатывают (аспирируют) загрязненную амниотическую жидкость [околоплодные воды], исследования не были достаточно большими, чтобы говорить о том, уменьшал ли хлоргексидин частоту стрептококковых (группы В) инфекций, или нет.

Промывание влагалища хлоргексидином не приводило к снижению ранних стрептококковых (группы В) инфекций у новорожденных, таких как сепсис, пневмония, менингит, или к снижению числа смертей, вызванных инфекцией. Промывание влагалища хлоргексидином может уменьшить колонизацию стрептококками (группы В) у новорожденных по сравнению с механическим промыванием с использованием плацебо (результаты одного исследования).

Для сравнения геля или крема хлоргексидина с плацебо или отсутствием лечения, не было представлено сколько-нибудь значимых результатов по влиянию на исходы.

Лёгкие побочные эффекты у матерей, такие как жжение или местное раздражение, чаще встречались у женщин, леченных хлоргексидином. При этом использовались различные лекарственные формы, дозы, частота дозирования и исходы. Не было отмечено каких-либо побочных эффектов у новорожденных.

Малое число исследований, которые сообщили о каждом интересующем исходе; и относительно небольшой размер выборки (1125 детей), учитывая низкую частоту стрептококковой (группы В) инфекции (один — три случая на 1000 живорожденных) в общей популяции, означает, что доказательства были ограничены.

Существует необходимость в проведении большого рандомизированного исследования с правильным дизайном, которое бы исследовало эффективность санации влагалища хлоргексидином для уменьшения частоты стрептококковой (группы В) инфекции у доношенных и недоношенных новорожденных, и преодолевало бы методологические ограничения исследований, включенных в настоящий обзор. Расходы, связанные с лечением антибиотиками и отсутствие квалифицированных кадров ограничили доступность профилактического лечения для женщин в бедных регионах мира. Хлоргексидин — недорогое средство, и он не влияет на развитие резистентности к антибиотикам.

Орошение влагалища лекарственными препаратами на Ленинском проспекте 66 | «Андреевские больницы

Орошение влагалища лекарственными препаратами – это лечебно-профилактическая манипуляция, производимая с целью очищения слизистой от патологических выделений. Промывание влагалища может проводиться как в стационаре или женской консультации, так и дома.

Область применения

Орошение влагалища является вспомогательным методом в комплексе лечения вульвовагинитов и кольпитов. Сама по себе эта процедура не может считаться самостоятельным методом лечения. Иногда она применяется в профилактических и гигиенических целях, например, после незащищенного полового акта в качестве защиты от ИППП.

Техника проведения

В условиях клиники орошение слизистой влагалища лекарственным веществом проводится на гинекологическом кресле. Влагалище расширяется посредством зеркал, после чего вводится раствор лекарственного средства. По истечении времени процедуры, длящейся 10–15 минут, зеркала удаляются, мышцы влагалища сокращаются и выталкивают раствор наружу. В домашних условиях процедуру проводят с помощью резиновой клизмы с мягким наконечником или специального ирригатора. Оптимальная поза для процедуры – лежа на спине в ванне с приподнятыми ногами.

Средства для влагалищных спринцеваний

Для влагалищных спринцеваний используются растворы антисептиков или противовоспалительных препаратов. С целью устранения инфекций применяются Хлоргексидин, Мирамистин, Интим-спрей. В качестве противовоспалительных средств широко применяются настой ромашки, раствор борной кислоты, фурацилина или содовый.

Противопоказания

Промывание влагалища растворами лекарственных средств имеет некоторые ограничения. Процедура противопоказана:

• при беременности: возрастает риск преждевременных родов или передачи инфекции плоду;

• при воспалительных заболеваниях: метроэндометрит, параметрит;

• при менструации;

• несколько недель после родов или аборта.

Подготовка к процедуре

Перед процедурой следует провести туалет наружных половых органов.

КЛИНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ, ДИАГНОСТИКА, РЕЗУЛЬТАТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО И ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ АКАНТАМЕБНОГО КЕРАТИТА | Каспарова

1. Moore M, McCulley J, Kaufman H, Robin J. Radial Keratoneurltis as a Presenting Sign in Acanthamoeba keratitis. Ophthalmology. 1986;93(10):1310-1315. doi:10.1016/s0161-6420(86)33572-3.

2. Moore M, McCulley J, Newton C, Cobo L, Foulks G, O’Day D. Acanthamoeba Keratitis; a growing problem in hard and soft contact lenses wearers. Ophthalmology. 1987;94(12):1654-1661. doi: 10.1016/s0161-6420(87)33238-5.

3. Dart J, Radford C, Minassian D, Verma S, Stapleton F. Risk Factors for Microbial Keratitis with Contemporary Contact Lenses. Ophthalmology. 2008;115(10):16471654.e3.doi:10.1016/j.ophtha.2008.05.003.

4. Волков В.В., Забайкина Т. П. Каминская, Л.Ю., Астахов С.Ю., Гордеева Л.М. Акантамебный кератит (по данным литературы и собственным наблюдениям). Вестник офтальмологии. 1994;110(1):28-31. [Volkov V.V., Zabajkina T.P., Kaminskaja L.Ju. Astahov S.Ju, Gordeeva L.M. Acanthamoebic keratitis (according to the literature and own observations). [Annals of ophthalmology=Vestnik oftal’mologii. 1994;110(1): 28-31. (in Russ.)].

5. Околов И.Н., Каргальцева Н.М., Науменко В.В., Никулин С.А. Акантамеба и акантамебный кератит. Руководство для врачей под ред. Л.И.Балашевича. Санкт-Петербург. 2005:54. [Okolov I.N., Kargal’ceva N.M., Naumenko V.V., Nikulin S.A.. Acanthameba and acanthameba keratitis / Manual for doctors. ed. L.I.Balashevich — SPb 2005:54 (in Russ.)].

6. Аветисов С. Э., Гордеева Л. М., Григорян М. Б. Акантамебные поражения роговицы. Вестник офтальмологии. 2001;117(5):53-55. [Avetisov S. Je., Gordeeva L. M., Grigorjan M. B. Acanthamoebae lesions of the cornea [Annals of ophthalmology=Vestnik oftal’mologii. 2001;117(5):53-55 (in Russ.)].

7. Майчук Ю.Ф, Майчук Д.Ю. Клинические формы акантамебного кератита в свете биомикроскопии и конфокальной микроскопии. Вестник Офтальмологии.

2004;120(1):45–47. [Majchuk Ju.F, Majchuk D.Ju. Clinical forms acanthameba keratitis in light of biomicroscopy and confocal microscopy. Annals of ophthalmology=Vestnik oftal’mologii. 2004;120(1):45–47. (in Russ.)].

8. Аветисов С.Э, Каспаров А.А., Марченко Н.Р., Федоров А.А., Каспарова Евг.А., Бородина Н.В., Лосева И.Е. Акантамебный кератит — клиника, диагностика и лечение. В сб. Современные методы диагностики и лечения заболеваний роговицы и склеры. М.2007:173-178. [Avetisov S.Je, Kasparov A.A., Marchenko N.R., Fedorov A.A., Kasparova Evg.A., Borodina N.V., Loseva I.E. Acanthameba keratitis — clinical features, diagnosis and treatment. Moscow. 2007:173-178 (in Russ.)].

9. Марченко Н.Р., Каспарова Евг..А. Диагностика акантамебного кератита. Вестник офтальмологии. 2016;132(5):103-109. [Marchenko N.R., Kasparova Evg.A. Diagnostic of Acanthameba keratitis. Annals of ophthalmology=Vestnik oftal’mologii 2016;132(5): 103-109 (in Russ.)].

10. Марченко Н.Р., Каспарова Евг..А. Лечение акантамебного кератита. Вестник офтальмологии . 2016;132(5):110-116. [Marchenko N.R., Kasparova Evg.A. Treatment of Acanthameba keratitis. [Annals of ophthalmology=Vestnik oftal’mologii. 2016;132(5):110-116 (in Russ.)].

11. Lorenzo-Morales J, Martín-Navarro CM, López-Arencibia A, Arnalich-Montiel F, Piñero JE, Valladares B. Acanthamoeba keratitis: an emerging disease gathering importance worldwide? Trends in Parasitology. 2013;29(4):181–187. doi: 10.1016/j.pt.2013.01.006.

12. Lim N, Goh D, Bunce C, Xing W, Fraenkel G, Poole TR, Ficker L. Comparison of polyhexamethylene biguanide and chlorhexidine as monotherapy agents in the treatment of Acanthamoeba keratitis. American Journal of Ophthalmology. 2008;145:130–135. doi: 10.1016/j.ajo.2007.08.040.

13. Turner NA, Russell AD, Furr JR, Lloyd D. Emergence of resistance to biocides during differentiation of Acanthamoeba castellanii. Journal of Antimicrobials and Chemotherapy. 2000;46(1):27–34. doi: 10.1093/jac/46.1.27

14. Roberts CW, Henriquez FL. 2010. Drug target identification, validation, characterisation and exploitation for treatment of Acanthamoeba (species) infections. Experimental Parasitology. 2009;126,91-96. doi: 10.1016/j.exppara.2009.11.016.

15. Nguyen TH, Weisenthal RW, Florakis GJ, Reidy JJ, Gaster RN, Tom D. Penetrating keratoplasty in active Acanthamoeba keratitis. Cornea. 2010;29:1000–1004. doi: 10.1097/ICO.0b013e3181cc79a1.

16. Ficker F.A, Kirkness C, Wright P. Prognosis for keratoplasty in Acanthamoeba keratitis. Ophthalmology. 1993;100:105-110. doi:10.1016/S0161-6420(93)31707-0

17. Brooks JG Jr, Coster DJ, Badenoch PR Acanthamoeba keratitis reesolution after epithelial debridement. Cornea.1994;13:186-189.

18. Kandori M, Inoue T, Shimabukuro M, Hayashi H, Hori Y, Maeda N, Tano Y. Four cases of Acanthamoeba keratitis treated with phototherapeutic keratectomy. Cornea. 2010;29(10):1199–1202. doi: 10.1097/ICO.0b013e3181d3d674

19. Майчук Д.Ю., Чилингарян Л.Б., Кишкин Ю.И., Майчук Н.В. Хирургическое лечение акантамебного кератита методом фототерапевтической кератоэктомии. Анализ проблемы и клинический случай. Офтальмохирургия. 2011;6:51-54. Majchuk D.YU., Chilingaryan L.B., Kishkin YU.I., Majchuk N.V. Surgical treatment of Acanthamoeba keratitis with method of phototherapeutic keratectomy. Analysis of problem and clinical case. Ophtalmosurgery=Oftal’mohi rurgija . 2011;6:51-54. (in Russ.)].

20. Khan YA, Kashiwabuchi RT, Martins SA, Castro-Combs JM, Kalyani S, Stanley P, Flikier D, Behrens A. Riboflavin and ultraviolet light a therapy as an adjuvant treatment for medically refractive Acanthamoeba keratitis: report of 3 cases. Ophthalmology. 2011;118(2):324–331. doi: 10.1016/j.ophtha.2010.06.041

21. Бикбова Г. М. Зайнуллина Н. Б. Усубов Э. Л. Случай акантамебного кератита. Медицинский вестник Башкортостана 2012;7(6):93-95. Bikbova G. M. Zajnullina N. B. Usubov EH. L. Case of Acanthamoeba keratitis. Bashkortostan Medical Journal= Meditsinskiy vestnik Bashkortostana. 2012;7 (6): 93-95 (in Russ.)].

22. Abdulhalim B, Wagih MM, Gad AA, Boghdadi G, Nagy RR. Amniotic membrane graft to conjunctival flap in treatment of non-viral resistant infectious keratitis: a randomised clinical study. British Journal of Ophthalmology. 2015;99(1):59–63. doi:10.1136/bjophthalmol-2014-305224

23. Краснов М.М., Каспаров А.А., Ульянова Т.Ю., Фадеева Л.Л. «Полудан в лечении вирусных заболеваний глаза». М., 1990. Krasnov M.M., Kasparov A.A., Ul’yanova T.YU., Fadeeva L.L. Poludan in the treatment of viral diseases of the eye. Moscow, 1990 (in Russ.)].

24. Carnt N, Robaei D, Watson SL, Minassian DC, Dart JK. The Impact of Topical Corticosteroids Used in Conjunction with Antiamoebic Therapy on the Outcome of Acanthamoeba Keratitis. Ophthalmology. 2016;123(5):984-990. doi: 10.1016/j.ophtha.2016.01.020.

25. McClellan K, Howard K, Niederkorn JY, Alizadeh H. Effect of steroids on Acanthamoeba cysts and trophozoites. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2001;42:2885–2893.

26. Каспарова Евг.А. Гнойные язвы роговицы: клиника, диагностика, консервативное лечение. Вестник офтальмологии. 2015; 131(6):106-119. Kasparova Evg.A. Purulent corneal ulcers: clinic, diagnosis, conservative treatment. Annals of ophthalmology=Vestnik oftal’mologii. 2015;131(6):106-119 doi: 10.17116/oftalma2015131

«АЛЬБАСОФТ-ПЕНА» ЖИДКОЕ ПЕНЯЩЕЕСЯ МЫЛО С АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ЭФФЕКТОМ

Назначение: для гигиенической обработки и антибактериальной защиты кожи рук, тела в медицинских учреждениях (больницах, госпиталях, медицинских пунктах, лабораториях, поликлиниках, медицинских центрах), в оздоровительных и профилактических учреждениях (санаториях, детских лагерях, профилакториях и т.д.), на предприятиях пищевой промышленности, в детских учреждениях (ясли, детские сады, дома ребенка, школы, подростковые центры творчества), в образовательных учреждениях (колледжах, училищах, университетах, курсах повышения квалификации), в местах общественного пользования (туалетные комнаты супермаркетов, торгово-развлекательных центров и т.д.), в сфере социального обеспечения (хосписы, дома престарелых, дома ветеранов), в быту, на предприятиях общественного питания (рестораны, кафе, бары, столовые и т.д.).
Способ применения: нанести небольшое количество пены на увлажнённые поверхности рук. Смыть проточной водой через 30-40 сек. Для мытья тела: нанести пену на влажную губку, протереть кожные покровы, смыть проточной водой через 30-40 сек.
Основные характеристики:

• антибактериальный компонент: хлоргексидин.
• В рецептуру заложены защищающие и смягчающие  кожу рук компоненты, что обеспечивает сохранение здоровой кожи рук даже после многократного использования мыла в течение дня.
• Одного нажатия  достаточно, чтобы хорошенько вымыть руки. Технология вспенивания мыла позволяет значительно сократить расход мыла. Мягкое и деликатное мыло не оставляет подтёков и следов на раковине. В состав мыла входят только высококачественные ингредиенты, полностью соответствующие европейским стандартам безопасности.

 
У нас вы можете купить «Альбасофт-пена» жидкое пенящееся мыло с антибактериальным эффектом для диспенсера ТМ KEMAN К1 и диспенсеров зарубежного производителя S1, S2, S3, S4, S34 оптом по низкой цене.

В раздел «ПРОДУКЦИЯ»

Шампунь противомикробный с хлоргексидином 4%

Уникальная бессульфатная формула, сохраняющая активные свойства хлоргексидина длительное время.

Наличие молочной кислоты, способствующей регенерации и обновлению клеток, увлажнению и поддержанию естественного рн баланса кожно-шерстного покрова животного.

Хорошее пенообразование, легкость смывания.

1. Торговое наименование лекарственного препарата: Шампунь противомикробный с хлоргексидином 4% (Shampoo antimicrobial with chlorhexidine 4%).

Международное непатентованное наименование: хлоргексидин.

 

2. Лекарственная форма: раствор для наружного применения.

Препарат в 1 мл в качестве действующего вещества содержит: хлоргексидина биглюконат – 40 мг, а в качестве вспомогательных веществ: децил глюкозид, кокамидопропил бетаин, кокодиэтаноламид, молочную кислоту, ЭДТА Б, бензалкония хлорид, отдушку «BlueRiver» и воду очищенную.

 

3. По внешнему виду препарат представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость от светло-желтого до желтого цвета.

Срок годности препарата при соблюдении условий хранения в закрытой упаковке производителя – 3 года со дня производства.

Запрещается применение Шампуня противомикробного с хлоргексидином 4% по истечении срока годности.

 

4. Выпускают препарат во флаконах по 150 мл упакованных поштучно в картонные пачки в комплекте с инструкцией по применению, во флаконах по 200 и 250 мл, которые упаковывают в транспортную тару и снабжают инструкцией по применению.

 

5. Хранят препарат в закрытой упаковке производителя, в защищенном от прямых солнечных лучей месте, отдельно от продуктов питания и кормов при температуре от 0 °С до 25 °С.

 

6. Шампунь противомикробный с хлоргексидином 4% следует хранить в местах, недоступных для детей.

 

7. Неиспользованный лекарственный препарат утилизируют в соответствии с требованиями законодательства.

 

8. Условия отпуска: без рецепта ветеринарного врача.

10. Хлоргексидина биглюконат, входящий в состав препарата, является дихлорсодержащим производным бигуанида, обладает выраженным противомикробным действием, активен в отношении вегетативных форм грамотрицательных и грамположительных бактерий, а также дрожжей, дерматофитов и липофильных вирусов. На споры бактерий действует только при повышенной температуре.

Механизм действия хлоргексидина заключается во взаимодействии с фосфатными группами на поверхности бактериальной клетки, вследствие чего возникает смещение осмотического равновесия, нарушение целостности и гибель клетки. После мытья шампунем остаточное бактерицидное действие на коже сохраняется до 24 часов.

Не обладает кожно-резорбтивным действием.

Шампунь с хлоргексидином 4% по степени воздействия на организм относится к малоопасным веществам (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76), в рекомендуемых дозах не оказывает местно-раздражающего, резорбтивно-токсического и сенсибилизирующего действия. При попадании в глаза вызывает слабое раздражение.

 

11. Шампунь противомикробный с хлоргексидином 4% назначают собакам и кошкам с лечебно-профилактической целью при бактериальных (поверхностных и глубоких пиодерматитах), грибковых (малассезиозах и

дерматофитозах), смешанных и атопических поражениях кожи и её производных.

 

12. Противопоказанием к применению Шампуня противомикробного с хлоргексидином 4% является индивидуальная повышенная чувствительность к компонентам лекарственного препарата (в том числе в анамнезе). Не допускается применение препарата внутрь и введение в полости.

 

13. Шампунь противомикробный с хлоргексидином 4% применяют путем равномерного нанесения на смоченную теплой водой шерсть животного из расчета 1 мл на 1 кг массы животного, втирая массирующими движениями до образования пены, избегая попадания на слизистые оболочки. Через 5 – 10 минут шампунь тщательно смыть теплой водой, шерсть высушить и расчесать.

Для оптимального терапевтического эффекта применение препарата необходимо повторять каждые 3 – 5 дней, в зависимости от патологии, как минимум 3 – 4 недели.

 

14. При наружном применении случаи передозировки неизвестны. При случайном попадании внутрь практически не абсорбируется (следует сделать промывание желудка, используя молоко, сырое яйцо или желатин).

При необходимости проводится симптоматическая терапия.

 

15. Особенностей действия лекарственного препарата при его первом применении и отмене не выявлено.

 

16. Не допускается применение препарата животным моложе 3-х недельного возраста.

 

17. Следует избегать нарушений схемы применения препарата, так как это может привести к снижению его эффективности. В случае пропуска очередной обработки ее следует провести как можно скорее.

 

18. Побочных явлений и осложнений при применении препарата Шампунь противомикробный с хлоргексидином 4% в соответствии с настоящей инструкцией, как правило, не наблюдается. Следует избегать попадания шампуня в глаза и уши животного.

 

19. Сведения о взаимодействии Шампуня противомикробного с хлоргексидином 4% с ингредиентами кормов, лекарственными препаратами и кормовыми добавками отсутствуют.

 

20. Шампунь противомикробный с хлоргексидином 4% не предназначен для применения продуктивным животным.

21. При работе с Шампунем противомикробным с хлоргексидином 4% следует соблюдать общие правила личной гигиены и техники безопасности, предусмотренные при работе с лекарственными препаратами.

 

22. Во время работы запрещается пить, курить и принимать пищу. По окончании работы руки следует вымыть теплой водой с мылом.

Пустые флаконы из-под лекарственного препарата запрещается использовать для бытовых целей, они подлежат утилизации с бытовыми отходами.

 

23. При случайном контакте лекарственного препарата с кожей или слизистыми оболочками глаз их следует немедленно промыть большим количеством воды. Людям с гиперчувствительностью к компонентам препарата следует избегать прямого контакта с Шампунем противомикробным с хлоргексидином 4%. В случае появления аллергических реакций или при случайном попадании препарата в организм человека следует немедленно обратиться в медицинское учреждение (при себе иметь инструкцию по применению препарата или этикетку).

Ротокан-вилар экст. для приема внутрь флакон 50мл

Показания

Противопоказания

Состав

Способ применения

Особые указания

Воспалительные заболевания полости рта (афтозный стоматит, пародонтит, язвенно-некротический гингивостоматит). В гастроэнтерологии (в составе комбинированной терапии): гастродуоденит, хронический энтерит и колит.

Применение Ротокана противопоказано у больных с повышенной чувствительностью к растениям, содержащимся в препарате.

Ротокан – водно-спиртовой экстракт из смеси цветков ромашки, цветков ноготков и травы тысячелистника (2:1:1).

Местно. 5 мл раствора разводят в 200 мл теплой воды. При заболеваниях слизистой оболочки полости рта используют аппликации (15-20 мин) или ротовые ванночки (1-2 мин), 2-3 раза/сут, в течение 2-5 дней. При лечении пародонтита, после удаления зубного камня и выскабливания патологических десневых карманов в десневые карманы вводят на 20 мин тонкие турунды, обильно смоченные раствором, ежедневно или через день (4-6 раз). Внутрь — по 1/3-1/2 стакана (60-100 мл) раствора за 30 мин до еды или через 40-60 мин после еды, 3-4 раза/сут. Курс лечения — 2-3 нед. Микроклизмы: ректально — по 50-100 мл раствора после очистительной клизмы, 1-2 раза/сут. Курс лечения — 3-6 дней.

Особые указания: Хранят в прохладном, защищенном от света месте. Взаимодействие с другими препаратами: Не описано. Побочные эффекты: Аллергические реакции.

Врачи РФ

Chlorhexidine

Хлоргексидин*(Chlorhexidinum) D08AC02 Хлоргексидин Антисептики и дезинфицирующие средства

Спрей для наружного применения (спиртовой) 0,5%	1 фл.
активное вещество:
хлоргексидина раствор для приготовления лекарственных форм 20% (эквивалентно 5 г хлоргексидина биглюконата)	25 мл
вспомогательные вещества: спирт этиловый (этанол) 95% — 718,5 мл; вода очищенная, до получения раствора объемом 1 л

Бесцветная прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость с запахом спирта.

Фармакологическое действие — антисептическое, противомикробное.

Обладает антимикробной активностью в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий (Treponema spp., Neisseia gonorrhoeae, Tricyomonas spp., Chlamidia spp.), возбудителей внутрибольничных инфекций и туберкулеза, инфекций вирусной этиологии (вирусы гепатита, ВИЧ, герпес, ротавирусные гастроэнтериты, энтеровирусные инфекции, грипп и другие респираторно-вирусные инфекции), дрожжеподобных грибов рода Candida, дерматофитов.

Пролонгированное действие — до 4 ч.

гигиеническая обработка рук медицинского персонала, рук хирурга;

обработка кожи операционного и инъекционного полей, локтевых сгибов доноров;

дезинфекция небольших по площади поверхностей изделий медицинского назначения (включая стоматологические инструменты) при инфекциях бактериальной (включая внутрибольничные инфекции, туберкулез), грибковой (дерматофиты, кандидозы) и вирусной этиологии в лечебно-профилактических учреждениях;

гигиеническая обработка рук медицинского персонала учреждений различного профиля и назначения;

гигиеническая обработка рук работников предприятий пищевой промышленности и общественного питания, коммунальных служб.

гиперчувствительность;

дерматиты;

аллергические реакции.

С осторожностью: детский возраст.

Аллергические реакции (кожная сыпь), сухость кожи, зуд, дерматит.

Фармацевтически несовместим с мылом, щелочами и другими анионными соединениями (коллоиды, гуммиарабик, карбоксиметилцеллюлоза).

Наружно.

При гигиенической обработке рук медицинского персонала 5 мл средства наносят на кисти рук и втирают в кожу в течение 2 мин.

При обработке рук хирурга перед применением средства руки тщательно моют теплой проточной водой и туалетным мылом в течение 2 мин, высушивают стерильной марлевой салфеткой. Затем на сухие руки наносят средство порциями по 5 мл (не менее 2 раз) и втирают его в кожу рук, поддерживая их во влажном состоянии в течение 3 мин.

При обработке операционного поля или локтевых сгибов доноров кожу последовательно дважды протирают раздельными стерильными марлевыми тампонами, обильно смоченными средством. Время выдержки после окончания обработки 2 мин. Накануне операции больной принимает душ (ванну), меняет белье. При обработке операционного поля кожу протирают (в одном направлении) стерильным тампоном, смоченным средством. Время выдержки после окончания обработки 1 мин. Для обеззараживания небольших по площади поверхностей (в т. ч. столы, аппаратура, подлокотники кресел) поверхности протирают ветошью, смоченной средством. Норма расхода средства при такой обработке составляет 100 мл/м².

Перед дезинфекцией с изделий медицинского назначения удаляют видимые загрязнения: с наружной поверхности — с помощью тканевых салфеток, смоченных водой; внутренние каналы промывают водой с помощью ерша или шприца с соблюдением противоэпидемических мер (резиновые перчатки, фартук). Салфетки, промывные воды и емкости для промывания дезинфицируют кипячением или одним из дезинфицирующих средств по режимам, рекомендованным при вирусных парентеральных гепатитах (при туберкулезе — по режимам, рекомендованным при этой инфекции), согласно действующим инструктивно-методическим документам. Изделия после удаления загрязнения полностью погружают в раствор средства, заполняя им полости и каналы. Разъемные изделия погружают в разобранном виде. Емкости с раствором следует плотно закрывать крышками во избежание испарения спирта и снижения его концентрации.

Для дезинфекции изделий, предварительно отмытых от загрязнений, препарат может быть использован в течение 3 сут многократно (при условии хранения использованного средства в плотно закрытой емкости, во избежание изменения концентрации спирта). При появлении первых признаков изменения внешнего вида средства (включая появление хлопьев, помутнение) его следует заменить.

При наружном применении случаи передозировки неизвестны.

Не наносить на раны и слизистые оболочки. В случае попадания на слизистые оболочки глаза, их следует быстро и тщательно промыть водой и закапать 30% раствор сульфацила натрия (альбуцид), в случае необходимости обратиться к врачу.

При случайном попадании внутрь следует немедленно сделать промывание желудка большим количеством воды, затем дать адсорбент (10–20 табл. активированного угля). При необходимости проводится симптоматическая терапия.

Средство легко воспламеняется! Не допускать контакта с открытым пламенем и включенными нагревательными приборами.

Спрей для наружного применения 0,5% (спиртовой). По 70 и 100 мл во флаконах (бутылках) с насадкой и крышкой из ПЭ или укупоренных колпачком с распылительным устройством.

ООО «Росбио».

192019, г. Санкт-Петербург, ул. Мельничная, 12.

Тел./факс: (812) 567-12-71.

В прохладном, защищенном от света месте, в герметично укупоренной таре. (вдали от огня).

3 года.

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

Хлоргексидин — обзор | Темы ScienceDirect

Хлоргексидин

Хлоргексидин — это катионный бисгуанид, доступный в виде раствора и моющего средства. ⁷⁸ Хлоргексидин проявляет широкий спектр антибактериальной активности; он очень эффективен против грамположительных организмов, в меньшей степени против грамотрицательных. ^78,79 Гель хлоргексидина для перорального применения подавляет образование зубного налета и снижает тяжесть гингивита у собак. ⁸⁰ Катионная природа хлоргексидина позволяет ему связываться с отрицательно заряженными поверхностями во рту, такими как зубы и слизистые оболочки. ^78–80 Затем со временем высвобождается и обеспечивает продолжительный бактериостатический эффект. ⁷⁹ Хлоргексидин не всасывается тканями полости рта. ⁸⁰

Хлоргексидин коммерчески доступен в виде 0,12% геля для полоскания полости рта или геля для животных. Перед стоматологическим лечением и хирургическими вмешательствами в полости рта следует промыть полость рта антисептическим раствором, например хлоргексидином. ^38,81 Полоскание рта перед операцией хлоргексидином привело к значительному снижению бактериальных аэрозолей во время ультразвукового удаления зубных отложений у людей ⁸² и количества бактерий, попадающих в кровоток у собак. ⁸³ В ранее упомянутом исследовании, в котором сделан вывод о том, что послеоперационные антибиотики не предотвращают воспалительных заболеваний после операции на третьем моляре, рты всех пациентов перед удалением полоскали 0,2% хлоргексидином, что могло снизить бактериальную флору полости рта и, возможно, предотвратить инфекцию. и сухая розетка. ²⁷

В ветеринарной стоматологии ополаскиватели для полости рта с хлоргексидином можно использовать перед стоматологическими и хирургическими вмешательствами в полости рта, а также в послеоперационный период у некоторых пациентов с тяжелым воспалением полости рта или после удаления или других операций на полости рта.Хлоргексидин также можно использовать для уменьшения накопления зубного налета на поверхности зубов, поскольку многие владельцы могут не захотеть или не смогут чистить зубы своего питомца. Полоскания рта, содержащие хлоргексидин, также могут быть полезны при лечении хронического гингивостоматита у кошек. ⁸⁴

Побочные эффекты хлоргексидина у людей включают обратимое окрашивание зубов, усиление образования зубного камня и изменение вкусового восприятия. Частота побочных эффектов значительно снижается с 0.12% хлоргексидина по сравнению с 0,2%. ⁷⁹

Влияние хлоргексидина на образование зубного камня: исследование in vitro | BMC Oral Health

Сбор и подготовка слюны

Человеческая слюна, стимулированная жеванием воска, была взята у одного здорового мужчины (одного из авторов), который не ел пищу в течение 2 часов до сдачи крови. У субъекта не было признаков кариеса, и он не принимал антибиотики в течение как минимум 3 месяцев до сдачи крови. Слюну центрифугировали при 10000 g в течение 10 минут, и осадок ресуспендировали в бульоне для инфузии мозга и сердца (BHI) (Becton, Dickinson, and Company, Sparks, MD, USA).Суспензию доводили до OD ₆₀₀ 0,2 и использовали в качестве инокулята для роста биопленок. Супернатант стерилизовали, как описано ранее [16], и использовали для образования пленок.

Образование биопленок

Биопленки были созданы с использованием устройства MBEC ™ (Innovotech, Эдмонтон, Канада) в соответствии с методом, описанным Pesciaroli et al. [17] с некоторыми изменениями. Устройство состояло из пластиковой крышки с 96 штифтами, покрытыми гидроксиапатитом (ГА), и отдельных лунок (рис.1). После образования пленки в течение 2 часов при 37 ° C колышки переносили в 200 мкл бактериального инокулята, описанного выше, и инкубировали в течение 1 часа при 37 ° C в аэробных условиях, позволяя микроорганизмам колонизировать колышки. Затем колышки переносили в бульон BHI, содержащий 0,5% сахарозы, и инкубировали в анаэробных условиях при 37 ° C в течение 3 дней. Среду меняли каждые 12 ч до дня сбора урожая.

Рис. 1

Формирование биопленки с помощью устройства MBEC ™. a Изображение образования биопленки на колышке. b Образование биопленки на стержне после 3 дней инкубации. c SEM-изображение колышка. d СЭМ-изображение биопленки, связанной с слюной, появившейся на стержне после 3 дней инкубации. Полоски = 5,0 мкм

Обработка CHG и поглощение минералов

Биопленки, образовавшиеся на штырях, промывали для удаления несвязавшихся клеток, помещая крышку в промывочную пластину с ионообменной водой (IEW) на 10 с. Затем их выдерживали в течение 1 мин в дистиллированной воде (DW) или 0.12% CHG (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США), что представляет собой концентрацию обычного продукта для полоскания рта [18, 19]. После отмывки IEW в течение 1 мин биопленки переносили в кальцифицирующий раствор и инкубировали до 48 ч при максимальной температуре 37 ° C в анаэробных условиях (N ₂ 85%, CO ₂ 10%, O ₂ 5%). Раствор для кальцификации состоял из раствора A (NaCl 2,1 г, KCL 1,56 г, Na ₂ HPO ₄ · 12H ₂ O 0,9 г, NaH ₂ PO ₄ · 2H ₂ O 0.39 г, KSCN 0,87 г, мочевина 0,2 г, 3,3-диметилглутаровая кислота 0,8 г, NaOH 0,36 г и среда BHI 900 мл) и раствор B (CaCl ₂ · 6H ₂ O 0,33 г и дистиллированная вода 100 мл) [20]. Растворы A и B стерилизовали отдельно в течение 20 минут при 121 ° C и смешивали вместе непосредственно перед использованием. Биопленки подвергали воздействию CHG в течение 1 мин каждые 12 ч и переносили в новый кальцифицирующий раствор. Обработка DW служила контролем. Биопленки также погружали в BHI вместо кальцифицирующего раствора, чтобы определить количество минералов, поглощаемых средой.Краткое изложение плана эксперимента показано на рис. 2. Во время процесса эксперимента жизнеспособность бактерий проверялась путем оценки мутности среды.

Рис. 2

Схема эксперимента, показывающая график, процедуры и выборку. Белые стрелки указывают на средний обмен, а черные стрелки указывают на воздействие CHG. Отбор проб и анализ проводились в точках, обозначенных черными стрелками.

Минеральный анализ

Минеральный анализ был выполнен с использованием модификации метода, описанного Вонгом и Сиссонсом [21]. После назначенной обработки (0, 12, 24 и 48 ч в фазе поглощения минералов; рис.2) биопленки экстрагировали 1 мл 0,5 моль / л хлорной кислоты (Nacalai Tesque, Inc., Киото, Япония) и центрифугировали при 15000 г за 15 мин. Кальций (Ca) в супернатанте измеряли с помощью атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой (SPS1500; Seiko Instruments, Inc., Токио, Япония), а уровень фосфата (Pi) измеряли с помощью набора для анализа малахитового зеленого фосфата (Bioassay Systems, Hayward). , CA, USA) в соответствии с инструкциями производителя.Осадок ресуспендировали в 1 мл дистиллированной воды и регистрировали оптическую плотность (OD) при 620 нм. Рассчитанные концентрации Ca и Pi (ppm) были преобразованы в значения, соответствующие тому же бактериальному объему (OD = 1.0) [22]. Этот анализ выполняли в четырех повторах на обработку.

Анализ морфологического и химического состава

Колышки были отломаны от крышки и помещены в пустую пробирку-приемник, а образцы высушены в сухом боксе. После этого биопленки фиксировали 2% параформальдегидом и 2% параформальдегида.5% глутаральдегид в 0,1 моль / л какодилатного буфера в течение 1 ч при комнатной температуре. Все образцы дважды промывали физиологическим раствором с фосфатным буфером и дегидратировали в серии градиентных этанолов (50, 60, 70, 80, 90, 95 и 100% в течение 10 минут каждый). Затем образцы устанавливали на углеродные стержни и покрывали распылением золотым слоем толщиной 300 Å с использованием ионного устройства для нанесения покрытий (IC-50; Shimadzu, Киото, Япония). Морфологию и элементный состав анализировали с использованием электронно-зондового микроанализатора рентгеновской спектроскопии с дисперсией по длине волны с функцией наблюдения изображения (SEM-EPMA, EPMA1601; Shimadzu).Предел обнаружения элементов составлял примерно 1 мкм по глубине [23]. Этот анализ выполняли в четырех повторах на обработку. Для анализа изображений на каждом изображении случайным образом выбирали три точки на поверхности биопленки и рассчитывали соотношение Ca: Pi в каждой точке.

Статистический анализ

Статистический анализ выполняли с использованием SPSS 11.0 (SPSS Inc., Чикаго, США) и excel-toukei 7.0 (ESUMI Co., Ltd., Токио, Япония). Где применимо, данные представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение (SD).Статистические различия между разными группами анализировали с использованием двустороннего факторного дисперсионного анализа без репликации и теста Стила-Дуасса. Различия считались достоверными при p <0,05.

Хлоргексидин | Подкаст | Chemistry World

Бен Валслер

Ярко-розовый антисептический раствор, безусловно, выделяется из толпы, и, как обнаруживает Майк Фримантл, соединение, лежащее в основе гибискраба, и подобные красочные очищающие средства играют важную роль в современной хирургии, а история связана с одним из крупнейших убийц в мире.

Майкл Фримантл

Ранее в этом году я провел день в нашей местной больнице. Меня записали на операцию на груди под местной анестезией. Перед тем, как хирург сделал разрез, медсестра тщательно промыла мне грудь антисептическим раствором. Я спросил ее, что это за антисептик. — Хлоргексидин, — ответила она, добавив, что раньше использовали раствор йода.

Я был знаком с хлоргексидином. Мой стоматолог настоятельно рекомендовал мне регулярно чистить зубы зубным гелем, содержащим это соединение, чтобы предотвратить и лечить заболевание десен.

Хлоргексидин — это тип органического соединения, известного как бигуанид. Он используется в качестве противомикробного ингредиента в средствах для дезинфекции кожи, кремах и салфетках, повязках для ран, дезодорантах, зубных пастах и ​​многих других продуктах.

Его разработка в качестве антисептика и дезинфицирующего средства имеет долгую историю. Во время Второй мировой войны два британских химика, Фрэнсис Курд и Фрэнк Роуз, провели в исследовательских лабораториях ICI в Манчестере обширную работу по синтезу противомалярийных препаратов. В ноябре 1945 года они объявили об открытии нового лекарства — бигуанида, известного теперь как хлоргуанид или прогуанил. Его до сих пор используют для лечения и профилактики малярии.

Жизнь и карьера Курда были трагически оборваны в декабре 1948 года, когда он умер от травм, полученных несколькими днями ранее в железнодорожной аварии в Стокпорте, Чешир. Ему было 39 лет.

Роуз и его коллеги из ICI, однако, продолжали исследования бигуанидов, или «дигуанидов», как они их называли. В 1954 году группа сообщила, что один класс замещенных бигуанидов «продемонстрировал заметную антибактериальную активность in vitro против широкого круга микроорганизмов».Они сравнили активность 14 из этих производных и показали, что одно «обладает наиболее выдающимися… свойствами» против таких бактерий, как Staphylococcus aureus. Соединение, которому было присвоено торговое название ICI Hibitane, представляет собой белое кристаллическое твердое вещество с сильным основанием, которое лишь слабо растворяется в воде. Поэтому команда использовала водорастворимую диацетатную соль соединения для своих исследований.

Два года спустя Роуз и его соавтор из ICI Джеффри Суэйн описали получение водорастворимых дигидрохлоридных солей гибитана и родственных бигуанидов в статье, опубликованной в Journal of the Chemical Society .Они отметили, что хибитан «недавно был введен в медицинскую и ветеринарную практику под общим названием хлоргексидин».

В настоящее время диглюконатная соль хлоргексидина широко используется в биоцидных продуктах. Катион хлоргексидина имеет два бигуанидных фрагмента, каждый из которых содержит пять атомов азота и присоединен к хлорфенильной группе. Поэтому соединение иногда называют бисбигуанидом. Роуз и его коллеги назвали это бисдигуанидом. Как ни странно, диглюконат хлоргексидина также называют глюконатом хлоргексидина.Анион глюконата, а их два на каждый катион хлоргексидина в соли, является производным глюконовой кислоты. Кислота — это форма глюкозы с открытой цепью, которая естественным образом содержится во фруктах, меде и вине. Его производят в промышленных масштабах путем ферментации определенных видов грибов.

Диглюконат хлоргексидина и другие его соли являются катионными антисептиками. Положительно заряженные катионы хлоргексидина связываются с отрицательно заряженными клеточными стенками бактерий. Процесс разрушает клеточные мембраны, позволяя содержимому клетки выливаться наружу.Активность солей против бактерий зависит от их концентрации. Низкие концентрации предотвращают размножение бактерий, тогда как более высокие концентрации полностью уничтожают бактерии.

У каждого антисептика есть свои плюсы и минусы. Соли хлоргексидина обладают широким спектром биоцидной активности. Они проявляют превосходную остаточную активность после нанесения на кожу по сравнению с антисептиками на основе йода, которые имеют более низкую остаточную активность. В одном недавнем отчете указывается, что после двухминутного нанесения на кожу антисептики хлоргексидина продолжают убивать бактерии в течение 24 часов.Они также быстро действуют, хотя и не так быстро, как этанол и изопропанол, которые в настоящее время используются в повсеместно распространенных дезинфицирующих средствах для рук на спиртовой основе.

Соли хлоргексидина также проявляют хорошую активность против вирусов с оболочкой. Оболочки — это внешние покрытия, которые защищают вирусный генетический материал от иммунной системы хозяина. Коронавирусы, такие как тот, который вызывает Covid-19, являются вирусами с оболочкой. Итак, в какой степени хлоргексидин используется в имеющихся в продаже дезинфицирующих средствах для рук, чтобы помочь предотвратить распространение болезни?

Во время недавней экспедиции по магазинам в центр нашего города я не нашла в списке ингредиентов безрецептурного дезинфицирующего средства для рук с хлоргексидином.Однако некоторые из них были доступны для покупки в Интернете.

Существует всеобщее мнение, что тщательное мытье рук водой с мылом — лучший вариант гигиены рук. Если доступ к мылу и воде недоступен, например, у входов в магазины, то почти любое коммерческое дезинфицирующее средство для рук — даже если оно содержит только спирт и воду — является следующим лучшим вариантом.

Бен Валслер

Это был Майк Фримантл с хлоргексидином. На следующей неделе Катрина Кремер узнает, почему класс растворителей может изменить мир.

Катрина Кремер

По опыту могу сказать, что поиск идеального растворителя — не то, что нравится многим химикам. Поэтому я был удивлен, обнаружив, что класс растворителей был однажды признан «британской инновацией, которая, скорее всего, определит 21 век», разделив эту честь с такими вещами, как бозон Хиггса, органы, напечатанные на 3D-принтере, и компьютер Raspberry Pi.

Бен Валслер

Но какой класс растворителей может оказать такое влияние? Узнай больше у Катрины в следующий раз.А пока вы можете найти все соединения, которые мы рассмотрели, на сайте chemistryworld.com/podcasts и сообщить нам, если вы думаете, что мы упустили что-то важное, — напишите по адресу [email protected] или напишите в Твиттере @chemistryworld. Я Бен Валслер, спасибо, что присоединились ко мне.

Хлоргексидин индуцирует гены устойчивости к ванкомицину типа VanA у энтерококков

ВВЕДЕНИЕ

Enterococcus faecium и Enterococcus faecalis являются грамположительными бактериями и колонизаторами желудочно-кишечного тракта, в том числе колонизирующими условно-патогенными микроорганизмами раны и угрожающие кровоток 1, 2).Они особенно связаны с инфекцией кровотока, ассоциированной с центральной линией (CLABSI), типом внутрибольничной инфекции (HAI), которая возникает в результате использования центрального венозного катетера. Энтерококки связаны с 18% CLABSI в США (3).

Особую озабоченность при лечении CLABSI вызывают устойчивые к ванкомицину энтерококки (VRE), которые устойчивы к гликопептидному антибиотику ванкомицину. Ванкомицин образует комплексы с концевыми остатками d-аланил-d-аланина (d-Ala-d-Ala) предшественников пептидогликана, тем самым останавливая синтез пептидогликана (4, 5).VRE VanA- и VanB-типа имеют альтернативный путь синтеза клеточной стенки из-за приобретения ими транспозонов, содержащих гены устойчивости к ванкомицину. Гены позволяют энтерококкам образовывать модифицированные предшественники пептидогликанов, которые заканчиваются d-аланил-d-лактатом (d-Ala-d-Lac) вместо d-Ala-d-Ala (6-8). Ванкомицин имеет более низкое сродство к концам d-Ala – d-Lac (9), и с использованием этих предшественников могут быть образованы поперечные связи в клеточной стенке. Благодаря этому механизму клеточная стенка энтерококка становится очень устойчивой к действию ванкомицина.

Чтобы попытаться уменьшить количество внутрибольничных инфекций, в том числе вызванных VRE, медицинские учреждения применяют методы инфекционного контроля. Хлоргексидин представляет собой бисбигуанидный антисептик (10), который включается в ряд препаратов для борьбы с инфекциями, включая пропитанные хлоргексидином и серебром центральные венозные катетеры (11, 12). Практика купания с хлоргексидином рекомендуется во всех больницах неотложной помощи, чтобы уменьшить частоту возникновения CLABSI (13). Для купания с хлоргексидином пациенты ежедневно купаются с препаратом хлоргексидина, не требующим смывания, или мочалками, пропитанными хлоргексидином (14).Хлоргексидин остается на коже, создавая противомикробное покрытие, которое восстанавливается при каждом купании. Хлоргексидин амфипатичен и, вероятно, взаимодействует как с фосфолипидами, так и с белками на поверхности бактериальных клеток (15, 16). Сообщается, что его взаимодействие с мембраной аналогично взаимодействию антимикробных пептидов (15). Эти взаимодействия нарушают целостность и потенциал мембраны, что приводит к утечке цитоплазматических компонентов; при высоких концентрациях хлоргексидина происходит застывание цитоплазмы и полное разрушение клеточной мембраны, что оказывает бактерицидное действие (17–19). Для Bacillus subtilis, палочковидной грамположительной бактерии, хлоргексидин при МПК вызывает образование помятых пятен на поверхности клетки около полюсов клетки, что приводит к гипотезе о том, что хлоргексидин преимущественно взаимодействует с анионными липидами, расположенными в клетке B. subtilis. полюса (20).

Недавнее клиническое испытание, в котором сообщалось об отсутствии влияния купания с хлоргексидином на возникновение внутрибольничной инфекции (21), вызвало озабоченность по поводу воздействия купания с хлоргексидином на больничные патогены, включая отбор на снижение чувствительности к хлоргексидину и перекрестную резистентность к антибиотикам у пациентов. клиническое использование (22, 23).В недавнем исследовании была проведена полуколичественная оценка уровней хлоргексидина на коже 20 пациентов до и после купания с хлоргексидином, и было обнаружено, что уровни варьируются в зависимости от участка тела и времени после ванны (24). Уровни в пределах указанного диапазона МИК хлоргексидина для энтерококков (25–29) были обнаружены на коже пациента (24). В другом исследовании измеряли чувствительность к хлоргексидину для изолятов энтерококка CLABSI, полученных из больничных палат с использованием хлоргексидиновых ванн (30). Было замечено, что МПК хлоргексидина значительно увеличилась у этих изолятов по сравнению с изолятами CLABSI из палат без ванны (30).Результаты обоих исследований показывают, что энтерококки подвергаются воздействию субингибирующих концентраций хлоргексидина в клинических условиях в результате купания с хлоргексидином.

На основании исследований, показывающих, что VRE подвергаются воздействию субингибиторных уровней хлоргексидина, в этом исследовании мы использовали секвенирование РНК для оценки общих транскрипционных ответов E. faecium 1,231,410, штамма E. faecium (VREfm), устойчивого к ванкомицину VanA-типа. , воздействию потребительского продукта, содержащего хлоргексидин глюконат (CHG).Насколько нам известно, это первое исследование по оценке глобального транскрипционного ответа E. faecium на антисептик. Мы наблюдали сильную индукцию генов устойчивости к ванкомицину VanA-типа и генов, связанных с устойчивостью к даптомицину, при воздействии MIC CHG. Было обнаружено, что индукция генов устойчивости к ванкомицину с помощью CHG зависит от VanR и приводит к повышенной чувствительности к цефтриаксону в присутствии субингибиторного CHG. Наши результаты предполагают, что долгосрочное влияние купания с хлоргексидином на патогены HAI, такие как VRE, следует дополнительно изучить в лабораторных исследованиях.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Штаммы бактерий и условия роста. Штаммы бактерий, использованные в этом исследовании, показаны в таблице 1. E. faecium и E. faecalis культивировали при 37 ° C на агаре для инфузии сердца мозга (BHI) или в бульоне BHI. без перемешивания, если не указано иное. Bacillus subtilis культивировали при 37 ° C в бульоне для лизогенизации (LB) с агаром или в бульоне LB при встряхивании при 225 об / мин, если не указано иное. Штаммы Escherichia coli культивировали на LB. Антибиотики использовали в следующих концентрациях: хлорамфеникол, 15 мкг / мл для E.coli и E. faecium и 34 мкг / мл для B. subtilis и эритромицин, 10 мкг / мл для B. subtilis. Используемые концентрации ванкомицина указаны для конкретных экспериментов ниже.

ТАБЛИЦА 1

Бактериальные штаммы и плазмиды, использованные в этом исследовании

Рутинные методы молекулярной биологии.E. faecium была выделена геномная ДНК (гДНК) с использованием ранее опубликованного протокола (31). Электропорация E. faecium описана в дополнительном материале. Плазмиды очищали с использованием набора Qiagen Miniprep.Фрагменты ДНК очищали с использованием набора для очистки ПЦР Qiagen QIAquick. Полимеразу Taq (New England BioLabs [NEB]) использовали для рутинной ПЦР. Для клонирования использовали Phusion-полимеразу (Fisher). Реакции рестрикционной эндонуклеазы и ДНК-лигазы Т4 проводили в соответствии с инструкциями производителя (NEB). Регулярное секвенирование ДНК было выполнено центром ДНК центральной больницы Массачусетса (Бостон, Массачусетс). Праймеры, использованные в этом исследовании, показаны в таблице S1 в дополнительном материале.

Определения МИК. МИК определяли с помощью микроразбавления бульона. Производили двукратные серийные разведения лекарственного средства бульоном BHI в 96-луночном микротитровальном планшете. Ночную культуру бактерий разбавляли до оптической плотности 0,01 при 600 нм (OD ₆₀₀ ), и 5 мкл разведенной культуры использовали для инокуляции лунок планшета. OD _{, 600,} культур контролировали каждые 30 мин в течение 24 ч с использованием устройства для считывания микротитровальных планшетов (Synergy MX; Biotek). МИК определяли как самую низкую концентрацию лекарственного средства, при которой ОП ₆₀₀ лунки соответствовала ОП ₆₀₀ лунки отрицательного контроля (неинокулированная среда BHI).

Кинетические анализы роста. Для кинетики роста использовали безрецептурный продукт хлоргексидин глюконат (ХГГ), Hibiclens (4% [вес / объем] ХГГ с 4% раствором изопропилового спирта, называемый здесь H-CHG). анализы и эксперименты по секвенированию РНК. Ночные культуры E. faecium 1,231,410 разводили до OD ₆₀₀ 0,01 в бульоне BHI и инкубировали при 37 ° C при перемешивании со скоростью 100 об / мин до тех пор, пока OD ₆₀₀ не достигала 0,4-0,5. Двадцать пять миллилитров культуры добавляли к равным объемам предварительно нагретого бульона BHI, содержащего различные концентрации H-CHG, таким образом, чтобы конечные концентрации составляли 0 ×, 0,0.Были достигнуты 5 ×, 1 × или 2 × MIC H-CHG. Значения OD _{, 600,} отслеживали в течение 24 часов. Для подсчета жизнеспособности 100 мкл культуры, полученной в каждый момент времени, серийно разводили в 1 × фосфатно-солевом буфере, и соответствующие разведения распределяли по чашкам с агаром BHI. Секвенирование РНК

. РНК собирали из культур E. faecium 1,231,410, затем обрабатывали ДНКазой и проверяли на целостность (см. Дополнительный материал). Образцы РНК были отправлены для секвенирования РНК в основной центр Университета Тафтса (Бостон, Массачусетс). Подготовку библиотеки для секвенирования Illumina HiSeq 2000 выполняли с использованием набора для подготовки образцов многожильной РНК Illumina TruSeq с обработкой RiboZero для удаления рРНК. Набор позволил детектировать специфический для цепи транскрипт. Пятьдесят считываний оснований были получены при одностороннем секвенировании. Эксперимент по секвенированию РНК независимо проводили дважды. Результаты секвенирования РНК

анализировали с помощью программы CLC Genomics Workbench версии 7.5. Необработанные считывания секвенирования были сопоставлены с генами рРНК и тРНК E. faecium DO (номер доступа в GenBank NC_017960) с использованием параметров по умолчанию.Затем оставшиеся несобранные чтения были сопоставлены с черновиком эталонного генома E. faecium 1,231,410 (полногеномное секвенирование [WGS]; номер доступа GenBank NZ_ACBA00000000.1) с использованием параметров по умолчанию. Сопоставления считывания для контрольных и тестовых культур сравнивали с использованием алгоритма анализа RNA-Seq с параметрами по умолчанию. Значения экспрессии генов определяли количественно на основе RPKM (считываний на килобаз транскрипта на миллионы сопоставленных считываний), и эти значения сравнивали между контролем и условиями обработки H-CHG для расчета кратного изменения.Z-тест Кэла был использован для расчета значения P . Гены, активированные в культурах, обработанных H-CHG, с кратным изменением ≥10 и значением P <0,05 в каждом из двух испытаний были рассмотрены для дальнейшего анализа в этом исследовании.

RT-qPCR. Сто нанограмм РНК использовали для синтеза кДНК с Superscript II (Life Technologies) и случайных гексамеров в соответствии с инструкциями производителя. Для удаления РНК добавляли РНКазу H (NEB) и очищали кДНК с использованием набора для очистки QIAquick PCR (Qiagen).Пять нанограммов кДНК использовали в качестве матрицы в количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR) с праймерами для амплификации внутренних областей vanA , vanB или clpX (см. Таблицу S1 в дополнительном материале). Праймеры для RT-qPCR были сконструированы с использованием NCBI Primer-BLAST (32). RT-qPCR выполняли с помощью Cepheid Smart Cycler и SYBR green I (Sigma-Aldrich). Экспрессия гена vanA и — B была внутренне нормализована до clpX .Значения порогового цикла ( C _T ) использовали для расчета кратного изменения экспрессии гена vanA и — B между культурами, обработанными H-CHG, и контрольными культурами в соответствии с формулой FC = 2 ^{— (ΔΔ CT )} , где ΔΔ C _T = ( C _T из vanA или — B в культурах, обработанных H-CHG — C _T из clpX в H-CHG-обработанные культуры) — ( C _T из vanA или — B в контрольных культурах — C _T из clpX в контрольных культурах).Экспрессия vanA и — B в контрольной культуре была установлена ​​на 1. Количественно определены относительные кратные изменения экспрессии vanA и — B из двух независимых экспериментов (испытания 1 и 2).

Оценка активности промотора vanH _A в E. faecium 1,231,410.E. faecium 1,231,410 Активность промотора vanH оценивали с использованием экспрессионной плазмиды pTCV- lac (33), модифицированной для экспрессии устойчивости к хлорамфениколу (pPB101) (см. дополнительный материал).Область длиной 248 п.о., содержащую промоторную область vanH , амплифицировали из 1,231,410 гДНК E. faecium, расщепляли и лигировали с расщепленной EcoRI и BamHI pPB101, в результате чего получали плазмиду pPB102. pPB101 и pPB102 были введены в E. faecium 1,231,410 посредством электропорации, в результате чего были получены штаммы PB103 и PB104 соответственно. Анализы β-галактозидазы проводили для оценки активности промотора vanH при воздействии ванкомицина и различных концентраций H-CHG (см. дополнительный материал).Активность измеряли в двух экземплярах для каждой временной точки, и эксперимент проводили независимо четыре раза.

Оценка уровней VanX в культурах E. faecium 1,231,410 Гексагистидиновая метка была добавлена ​​в рамке считывания к C-концевому концу VanX (EFTG_02040) путем врезания последовательности ДНК в геном E. faecium 1,231,410, с получением штамма E. y faecium PB221 (см. дополнительный материал). Ночную культуру E. faecium PB221 разводили в бульоне BHI и инкубировали при встряхивании при 100 об / мин до OD ₆₀₀ , равного 0.От 4 до 0,5 было достигнуто. Культуру разделяли на бульон BHI с различными концентрациями H-CHG или ванкомицина, так что конечные концентрации 0 ×, 1/4 ×, 1/2 или 1 × MIC H-CHG или 20 мкг / мл ванкомицина были достигнут. Образцы культур отбирали для анализа через 1,5 и 2 ч инкубации. Общий растворимый белок выделяли из каждого образца, как описано в дополнительном материале. Равные количества (250 мкг) общего растворимого белка из каждого образца культуры загружали на 100 мкл промытых гранул агарозы никель-нитрилотриуксусной кислоты (Ni-NTA) (Qiagen).Гранулы дважды промывали 1 мл промывочного буфера с добавлением 45 мМ имидазола. Белки и шарики инкубировали вместе в течение 2 ч при 4 ° C. После инкубации шарики центрифугировали (13 300 × г в течение 2 минут при комнатной температуре) и дважды промывали 1 мл промывочного буфера с добавлением 75 мМ имидазола для удаления неспецифических белков. Затем краситель с 6-кратной загрузкой SDS добавляли непосредственно к шарикам и энергично кипятили в течение 10 мин. Образцы анализировали с помощью 12% SDS-PAGE, и уровни белка VanX оценивали с помощью вестерн-блоттинга на мембране из поливинилидендифторида (PVDF) с конъюгированным с щелочной фосфатазой моноклональным анти-полигистидиновым клоном His-1 антителом (Sigma-Aldrich) и Вестерн-блоттингом. Стабилизированный синим субстрат для щелочной фосфатазы (Promega) в соответствии с инструкциями производителя для подтверждения присутствия His-меченных белков VanX. Уровни белка VanX были количественно определены путем расчета интегрированного значения плотности (IDV) полос белка с использованием инструмента плотности пятна Alphaimager.

анализы репортера B. subtilis. Ранее разработанная репортерная система промотора vanH в гетерологичном хозяине Bacillus subtilis 168 (34) была использована для тестирования реакции промотора vanH на специфические компоненты H-CHG, а также роли . vanR и vanS в индукции. Для качественного анализа β-галактозидазы 0.3 мл ночной культуры каждого репортерного штамма наносили на агар LB, содержащий 5-бром-4-хлор-3-индил-β-d-галактопиранозид (X-Gal; 40 мкг / мл) с хлорамфениколом для BAU-101, хлорамфеникол и эритромицин для BAU-102 и эритромицин для BAU-103 и BAU-104. Были помещены бумажные диски, содержащие различные количества H-CHG (1 × или 2 × МИК) или 5 мкл исходного раствора ванкомицина 40 мг / мл (положительный контроль) или воды или исходного раствора канамицина 40 мг / мл (отрицательный контроль). на тарелках. Планшеты инкубировали в течение ночи при 37 ° C, а на следующий день переносили на 4 ° C для полного развития синего цвета вокруг дисков.Раствор хлоргексидина диацетата (Sigma-Aldrich), порошок хлоргексидина (Sigma-Aldrich), соль d-глюконата натрия (Sigma-Aldrich) и изопропиловый спирт также оценивались на предмет их способности индуцировать промотор vanH .

Оценка экспрессии vanA в E. faecium 1,231,410 Δ vanR и Δ vanRS . Гены vanR (EFTG_02044) и vanRS (EFTG_02043-44) были удалены в рамке 10 с использованием плазмы дополнительный материал).Микроразбавление бульона в бульоне BHI использовали для определения МИК ванкомицина и H-CHG для штаммов E. faecium 1,231,410 Δ vanR и Δ vanRS . РНК выделяли из культур, обработанных 0 × и 1 × MIC H-CHG в течение 15 мин, как описано выше. РНК также выделяли из культур, обработанных 50 мкг / мл ванкомицина в течение 2 часов. RT-qPCR выполняли, как описано выше, для оценки экспрессии vanA и clpX .

Synergy assays. Для проверки синергизма между CHG и цефтриаксоном или ванкомицином использовали микроразбавление бульона.Для испытаний на синергизм с цефтриаксоном в бульоне BHI (контроль) готовили 2-кратные серийные разведения свежего исходного раствора динатриевой соли цефтриаксона в воде (TCI) с концентрацией 1 мг / мл для E. faecalis и 50 мг / мл для E. faecium. , Бульон BHI с добавлением 2, 5 или 20 мкг / мл ванкомицина (положительный контроль) и бульон BHI с добавлением различных концентраций H-CHG или раствора диглюконата хлоргексидина (Sigma-Aldrich; разбавленный до 5% перед использованием) в 96-луночные микротитрационные планшеты. Для тестов на синергизм с ванкомицином, 2-кратные разведения свежего исходного раствора ванкомицина 40 мг / мл были сделаны в бульоне BHI или бульоне BHI с добавлением различных концентраций H-CHG.Ночные культуры E. faecalis и E. faecium разбавляли до OD ₆₀₀ 0,01, и 5 мкл разведенной культуры использовали для инокуляции лунок планшета. OD _{, 600,} культур измеряли после 24 ч инкубации при 37 ° C.

Регистрационный номер последовательности. Данные о секвенировании исходной РНК Illumina, полученные в этом исследовании, доступны в Архиве чтения последовательностей под регистрационным номером SRP065084.

РЕЗУЛЬТАТЫ

МИК хлоргексидина для энтерококков, использованных в этом исследовании.E. faecium 1,231,410 был выделен в 2005 году и представляет собой изолят кожных и мягких тканей клады A1, несущий гены устойчивости к ванкомицину VanA-типа (35, 36). E. faecium 1,231,410 был модельным штаммом, использованным в наших экспериментах с хлоргексидином.

Предыдущие исследования показали, что МИК хлоргексидина E. faecium и E. faecalis колеблются от 0,5 до 16 мкг / мл, а МИК хлоргексидина для VRE и чувствительных к ванкомицину энтерококков аналогичны (25–29). Безрецептурный продукт Hibiclens с хлоргексидином глюконатом (называемый здесь H-CHG) был выбран для наших исследований, потому что мы стремились оценить широко доступный потребительский продукт, содержащий хлоргексидин. МИК H-CHG для E. faecium 1,231,410 было определено как разведение H-CHG 1/8 192, что соответствует 4,9 мкг / мл хлоргексидина. МИК H-CHG для всех исследуемых энтерококков (таблица 1) варьировала от 2,5 до 9,8 мкг / мл. Эти значения находятся в диапазоне, ожидаемом на основании предыдущей литературы (25–29). Для дальнейшего подтверждения МИК раствора хлоргексидина диглюконата от Sigma-Aldrich была определена для E. faecium 1,231,410 и оказалась идентична МИК H-CHG.

Кинетика роста E.faecium 1,231,410 с H-CHG. Затем была изучена кинетика роста культур E. faecium 1,231,410, подвергшихся воздействию различных концентраций H-CHG. Для этих экспериментов экспоненциально растущую культуру E. faecium 1,231,410 в бульоне BHI разделяли на колбы, содержащие BHI с H-CHG таким образом, чтобы конечные концентрации H-CHG составляли 1/2 × MIC, 1 × MIC и 2 × MIC. достигнут. OD ₆₀₀ культур, подвергшихся воздействию 1 × MIC и 2 × MIC, снизилась по сравнению с таковой культур, не подвергавшихся воздействию H-CHG (рис.1А). OD ₆₀₀ культур, растущих в 1/2 × MIC, снизилась в течение 30 минут после воздействия H-CHG, но затем начала увеличиваться. После 24 ч инкубации OD ₆₀₀ культур E. faecium 1,231 410, подвергнутых воздействию 1 × MIC H-CHG, были эквивалентны таковым для контрольных культур; 1 231 410 культур E. faecium, подвергнутых воздействию 2 × MIC, не восстановились (данные не показаны).

Рис. 1

Кинетика роста E. faecium 1,231,410 после обработки H-CHG. (A) Типичная кривая оптической плотности.E. faecium выращивали при 37 ° C в BHI со встряхиванием при 100 об / мин до тех пор, пока оптическая плотность при 600 нм (OD ₆₀₀ ) не достигла 0,3-0,4. Двадцать пять миллилитров культуры добавляли к равному объему предварительно нагретого BHI, содержащего различные концентрации H-CHG, так что конечные концентрации 0 × (контроль; зеленые кружки), 1/2 × (красные квадраты), 1 × (синие кресты ) или 2 × MIC (оранжевые шестиугольники). Культуры инкубировали при 37 ° C при встряхивании и контролировали OD ₆₀₀ . (B) Кривая жизнеспособности.Оценивали количество жизнеспособных клеток (КОЕ на миллилитр) для культур, обработанных 1 × MIC (синие кресты) и контрольных культур (зеленые кружки). Планки погрешностей указывают на стандартные отклонения от 3 независимых экспериментов. *, P <0,05 по одностороннему критерию Стьюдента t ; значимость оценивалась только для 15-минутной временной точки. Для транскриптомного анализа РНК собирали из культур, подвергнутых воздействию 0 × (контроль) и 1 × MIC H-CHG в течение 15 мин.

Была оценена жизнеспособность культур, обработанных 1 × MIC H-CHG, и контрольных культур, и через 15 мин воздействия H-CHG наблюдалось значительное уменьшение количества жизнеспособных клеток (рис.1Б). Среднее значение КОЕ на миллилитр для контрольных культур в этот момент времени составляло 1,7 × 10 ⁸ , тогда как для культур, обработанных H-CHG, оно составляло 5,0 × 10 ⁷ .

Анализ секвенирования

РНК реакции E. faecium 1,231,410 на H-CHG. Секвенирование РНК Illumina проводили для культур, подвергнутых воздействию 0 × (контроль) и 1 × (тест) МИК H-CHG в течение 15 мин, обозначенных стрелкой на рис. Рис. 1А. Гены, дифференциально экспрессирующиеся вскоре после воздействия H-CHG, могут быть репрезентативными для реакции E. faecium на контакт с кожей пациента, загрязненной суббактерицидным CHG, что представляет интерес для нашего исследования.

Эксперимент по секвенированию РНК проводили независимо дважды. Мы идентифицировали 35 генов, активируемых в ≥10 раз в клетках, подвергнутых воздействию H-CHG, в обоих испытаниях по секвенированию РНК (таблица 2). В этом исследовании мы сосредоточили внимание на сильно активированных генах, потому что мы пришли к выводу, что эти гены могут защищать от воздействия H-CHG. Мы разделили 35 генов на 4 группы: гены устойчивости к ванкомицину, гены, связанные с экстрацитоплазматическим стрессом, предсказанные транспортные системы и разные гены. Набор данных S1 в дополнительном материале представляет собой расширенную версию таблицы 2, в которой показаны данные картирования чтения, прогнозы котранскрипции и анализ консервативных доменов последовательностей белков.

ТАБЛИЦА 2

Дифференциально повышенная регуляция генов в культурах, обработанных 1 × MIC H-CHG, по сравнению с контрольными культурами, идентифицированными двумя независимыми испытаниями секвенирования РНК

Среди наиболее высоко регулируемых генов в обработанных H-CHG культурах была устойчивость к ванкомицину типа VanA кластер генов (таблица 2; см. также набор данных S1). vanHAX , экспрессия которого регулируется двухкомпонентной системой VanRS (37), включает структурные гены, необходимые для устойчивости к ванкомицину (см. Ссылку 5).Дегидрогеназа VanH превращает пируват в d-лактат, который используется лигазой VanA для образования предшественников d-Ala – d-Lac клеточной стенки. d-Ala-d-Ala, генерируемый хромосомной кодируемой d-Ala-d-Ala лигазой, Ddl, гидролизуется d-Ala-d-Ala дипептидазой VanX. Дополнительные гены vanY и vanZ кодируют карбоксипептидазу, которая отщепляет d-Ala от предшественников поздних клеточных стенок, оканчивающихся на d-Ala – d-Ala и белок с неизвестной функцией, соответственно (5). Индукция этих генов в присутствии H-CHG предполагает, что стресс, вызванный хлоргексидином и / или хлоргексидином, индуцирует экспрессию гена устойчивости к ванкомицину VanA-типа у E.faecium.

Другие гены с высокой активностью ранее участвовали в реакции энтерококкового экстрацитоплазматического стресса (таблица 2; см. Также набор данных S1). Мы выявили перекрытие между транскриптомным ответом H-CHG у E. faecium 1,231,410 с транскриптомным ответом E. faecalis OG1RF на активные антибиотики клеточной стенки ампициллин, бацитрацин, цефалотин и ванкомицин (38) и с ответом E. faecalis OG1X. к кодируемому плазмидой токсину Fst, который, вероятно, взаимодействует с клеточной мембраной OG1X, вызывая стресс (39, 40). Кроме того, мутации в четырех генах в нашем наборе данных связаны с нечувствительностью к даптомицину у E. faecalis и E. faecium (41–44). Особый интерес представляет то, что гены liaXYZ , которые непосредственно регулируются регулятором стресса клеточной оболочки LiaR в E. faecalis (45), имеют высокую регуляцию в обработанных H-CHG клетках E. faecium. Наконец, htrA , кодирующая предсказанную сериновую протеазу, заякоренную в мембране, также подвергалась повышенной регуляции. Белки семейства HtrA важны для восприятия и оборота неправильно свернутых и неправильно локализованных белков в филогенетически разнообразных организмах (46).Белок семейства HtrA E. coli DegS участвует в активации RpoE, сигма-фактора экстрацитоплазматической функции, в ответ на неправильно локализованные белки (46). Повышающая регуляция htrA предполагает, что восприятие и / или оборот неправильно свернутых или неправильно локализованных белков на поверхности клетки важны для ответа на стресс H-CHG. В целом, эти результаты показывают, что в течение 15 минут после воздействия H-CHG E. faecium 1,231,410 вызывает транскрипционный ответ на экстрацитоплазматический стресс. Это согласуется с тем, что хлоргексидин вызывает повреждение клеточной стенки и / или клеточной мембраны у E.faecium 1,231,410.

Несколько предсказанных систем мембранного транспорта были сильно активированы в ответ на воздействие H-CHG (таблица 2; см. Также набор данных S1 в дополнительном материале). Семь из этих генов ранее были вовлечены в реакцию стресса на металлы у E. faecalis; в частности, они активируются в ответ на цинк (47, 48). Кроме того, ортолог EFTG_01192 в E. faecalis V583, называемый EF1057, подавляется в ответ на избыток хлорида железа (49). Ортологи другой предсказанной транспортной системы, закодированной EFTG_02287-02288 в E.faecium 1,231,410 и EF2226-EF2227 в E. faecalis V583, были активированы в обработанном токсином Fst E. faecalis OG1X (39), что указывает на перекрытие с ответом на экстрацитоплазматический стресс.

Предполагаемая транспортная система, кодируемая предсказанным опероном из 5 генов (EFTG_02682-EFTG_02686), была сильно активирована в E. faecium 1,231,410, подвергнутой воздействию H-CHG (таблица 2; см. Также набор данных S1). Интересно, что этот оперон не присутствует в геномах 18 E. faecalis или 3 клады B (комменсальной клады) E. faecium, ранее сравниваемых с помощью полногеномного анализа (35), а также он не присутствует в геномах E.faecium DO, обычный эталонный штамм для исследований E. faecium. Однако оперон присутствует в плазмиде p1 размером 131 т.п.н., присутствующей в изоляте Aus0085 кровотока VRE E. faecium VanB-типа (открытые рамки считывания [ORF] от EFAU085_p1045 до EFAU085_p1041) (50), и присутствует в кладе A1 8 и кладе 6. Изоляты E. faecium A2 из недавнего сравнительного исследования генома (36). Этот результат важен, поскольку он демонстрирует, что дополнительные гены во вспомогательном (т.е. неосновном) геноме E. faecium, кроме генов устойчивости к ванкомицину VanA-типа, реагируют на воздействие H-CHG.Что касается функции, анализ консервативного домена показывает, что оперон кодирует транспортную систему АТФ-связывающей кассеты (ABC), потенциально транспортирующую полиамины или железо (см. Набор данных S1).

Другие гены с повышенной регуляцией включают EFTG_00189, кодирующий предполагаемый окислительно-восстановительный регулятор транскрипции, и EFTG_01890, кодирующий белок с роданеподобным доменом, который также может участвовать в окислительно-восстановительном стрессовом ответе. EFTG_01778, кодирующий предполагаемую глюкозамин-6-фосфатдезаминазу, также имеет повышенную регуляцию.Этот ген, вероятно, участвует в метаболизме N -ацетилглюкозамина у E. faecium (51).

Повышенная регуляция vanA в ответ на H-CHG происходит в других VRE типа VanA и не является штаммовой или видоспецифичной. Посредством секвенирования РНК мы наблюдали до 104-кратную повышенную регуляцию генов устойчивости к ванкомицину ( vanHAX ) в E • faecium 1,231,410 подвергали воздействию 1 × MIC H-CHG в течение 15 мин. Из-за клинического значения устойчивости энтерококков к ванкомицину мы дополнительно изучили индукцию vanHAX под действием H-CHG.RT-qPCR для экспрессии vanA была проведена для подтверждения результатов секвенирования РНК (рис. 2). Экспрессия vanA была внутренне нормализована к гену домашнего хозяйства clpX , который кодирует субъединицу АТФазы протеазы ClpXP домашнего хозяйства (52), и не было обнаружено, что он дифференциально регулируется в испытаниях секвенирования РНК (данные не показаны). Используя RT-qPCR, E. faecium 1,231,410 vanA был в 64 раза активирован в культурах, подвергшихся воздействию 1 × MIC H-CHG в течение 15 минут, по сравнению с культурами, не подвергавшимися воздействию (рис.2), подтверждающий результаты секвенирования РНК. vanA был повышен до 47 и 18 раз в культурах, подвергнутых воздействию 1/2 × MIC и 1/4 × MIC H-CHG, соответственно, в течение 15 мин (рис. 2).

Рис. 2.

H-CHG индуцирует гены устойчивости к ванкомицину VanA-типа у E. faecium и E. faecalis. RT-qPCR использовали для количественной оценки экспрессии vanA или vanB при воздействии H-CHG в течение 15 минут по сравнению с контрольными условиями. Экспрессия vanA и — B была внутренне нормализована до clpX , как описано в тексте.Экспрессия vanA или — B в контрольных культурах была установлена ​​на 1 (не показано). Кратность изменения экспрессии vanA или — B в культурах, обработанных 1 × MIC H-CHG, относительно контроля количественно оценивали в двух независимых экспериментах для всех опрошенных штаммов. Дополнительно исследовали экспрессию vanA E. faecium 1,231,410 при воздействии 1/4 × или 1/2 × MIC H-CHG в течение 15 мин. Efm, E. faecium; Efs, E. faecalis; HIP, HIP11704; ТУХ, ТУх5-64.

Затем мы оценили, является ли индукция H-CHG vanA штаммовой или видоспецифичной, с помощью анализа RT-qPCR VRE E. faecium 1,231,502, VRE E. faecium типа VanA 1,230,933 и VRE E. faecalis HIP11704 типа VanA. Индукция vanA в ответ на H-CHG наблюдалась для всех трех штаммов, хотя кратность активации vanA в E. faecium 1,231,502 была умеренной (по крайней мере в 8,6 раза) по сравнению с таковой в других штаммах (по крайней мере, В 50 раз) (рис.2). Из этих результатов мы заключаем, что индукция vanA с помощью H-CHG не является штаммовой или видоспецифичной.

Интересно, что не наблюдалось усиление регуляции vanB после воздействия 1 × MIC H-CHG для изолята E.faecium TUh5-64 или в изоляте VRE типа VanB E. faecalis V583 (рис. 2). Максимальное наблюдаемое кратное изменение экспрессии vanB составило 1,3 для одного из испытаний TUh5-64. Ключевое различие между системами типа VanA и VanB заключается в специфичности индукции. Системы типа VanB индуцируются только ванкомицином, в то время как системы типа VanA индуцируются ванкомицином, тейкопланином и другими соединениями (более подробно обсуждаемыми ниже). Эта разница в специфичности связана с их соответствующими регуляторными двухкомпонентными системами VanRS, которые имеют небольшую идентичность аминокислотных последовательностей (53).Индукция vanA , но не vanB с помощью H-CHG предполагает, что система VanRS VanA-типа реагирует на стресс, вызванный хлоргексидином и / или хлоргексидином.

Промотор vanH E. faecium 1,231,410 реагирует на H-CHG. Гены vanHAX имеют общий промотор перед vanH (37, 54). Мы стремились определить, вносит ли повышенная активность промотора vanH вклад в индукцию vanHAX в ответ на воздействие H-CHG.Ранее идентифицированный сайт начала транскрипции vanH , предсказанные сайты связывания сигма-фактора и последовательности инвертированных повторов и предсказанные сайты связывания VanR перед кодирующей областью vanH (37, 54) консервативны в E. faecium 1,231,410 (данные не показаны) . Однако частичная последовательность IS 1251 вставлена ​​в положение -102 относительно сайта начала транскрипции vanH . Эта вставка разрушает 5 ’15 п.н. фосфорилированного следа ДНК VanR размером ~ 80 п.н., ранее идентифицированного Holman et al.(54), хотя сигма-фактор и предполагаемые сайты связывания регуляторов не повреждены. Последовательность между вставкой IS 1251 и vanH была амплифицирована и использована для создания репортерной конструкции. Плазмида pPB102 содержит транскрипционное слияние промотора vanH с геном lacZ в pPB101 (pTCV- lac-cat ).

β-Галактозидазная активность штаммов E. faecium 1 231 410, несущих pPB101 или pPB102, была оценена в присутствии ванкомицина и в присутствии различных концентраций H-CHG через 0, 30, 60, 90 и 120 мин после воздействия (рис.3). Для E. faecium 1,231,410, несущих pPB102, активность промотора vanH увеличивалась по кривой роста в контрольных условиях, как и ожидалось на основании предыдущих исследований активности промотора vanH (55). Добавление ванкомицина стимулировало активность промотора vanH , как и ожидалось. Добавление 1/4 × MIC H-CHG к культурам приводило к значительному увеличению активности промотора vanH со временем по сравнению с контролем (фиг. 3). Активность β-галактозидазы была эквивалентна таковой для контроля для культур, обработанных 1/2 × MIC H-CHG, и была незначительной для культур, обработанных 1 × MIC H-CHG (данные не показаны).Эти результаты, вероятно, связаны с ингибирующим действием H-CHG на рост репортерного штамма при 1/2 × и 1 × MIC (фиг. 3A). Не было обнаружено активности β-галактозидазы для E. faecium 1,231,410, трансформированных pPB101 (данные не показаны). На основании этих результатов мы пришли к выводу, что на активность промотора vanH напрямую влияет добавление H-CHG, что приводит к усилению транскрипции vanHAX . Эти результаты показывают, что индукция vanHAX под действием H-CHG зависит от двухкомпонентной системы VanRS.

FIG 3

Активность промотора vanH в E. faecium 1,231,410. (А) Средняя кривая роста E. faecium PB104. Аликвоты экспоненциально растущей культуры E. faecium PB104 с OD ₆₀₀ от 0,4 до 0,5 добавляли к 25 мл BHI-хлорамфеникола (контроль; красные кружки) или BHI-хлорамфеникола, содержащего H-CHG или ванкомицин, таким образом, чтобы 1/4 × MIC H-CHG (зеленые треугольники), 1/2 × MIC H-CHG (синие треугольники), 1 × MIC H-CHG (оранжевые ромбы) или 2 мкг / мл ванкомицина (розовые квадраты). .Культуры инкубировали при встряхивании при 100 об / мин при 37 ° C и отслеживали OD ₆₀₀ . Планки погрешностей указывают на стандартные отклонения от 4 независимых экспериментов. (B) Анализы активности β-галактозидазы. Анализы активности ферментов проводили, как описано в тексте. Образцы собирали из культур E. faecium PB104 в различные моменты времени после воздействия H-CHG, ванкомицина или контрольных условий. Планки погрешностей указывают на стандартные отклонения от 4 независимых экспериментов. Для оценки значимости использовался односторонний критерий Стьюдента t .*, P <0,05; **, P <0,005; ***, P <0,0005.

Уровни белка

VanX повышаются после воздействия H-CHG. Мы попытались определить, приводит ли повышенная транскрипция vanHAX к увеличению уровней белков, кодируемых van . Предыдущие исследования показали, что повышенная активность промотора vanHAX не обязательно приводит к устойчивости к ванкомицину, поскольку требуется высокий уровень экспрессии генов (56, 57).Поскольку ванкомицин также является индуктором vanHAX , было невозможно использовать устойчивость к ванкомицину в качестве фенотипического результата. Для оценки трансляции в результате увеличения транскрипции vanHAX с H-CHG, кодирующая последовательность гексагистидина длиной 18 п.н. была выбита в геном E. faecium 1,231,410 перед стоп-кодоном vanX . В предыдущих исследованиях сообщалось об использовании ферментного анализа дипептидазы VanX (56–58) или антитела, специфичного к VanX (59), для обнаружения повышенной активности VanX или уровней белка в культурах, обработанных ванкомицином или другими тестируемыми соединениями. Таким образом, существует прецедент обнаружения VanX как показателя устойчивости к ванкомицину.

Сначала мы сравнили кинетику роста и МИК ванкомицина штамма «нокаут» гексагистидина, E. faecium PB221, по сравнению со штаммом дикого типа. Эти анализы были выполнены для проверки того, что добавление последовательности не влияет на устойчивость штамма к ванкомицину и не вызывает дефект роста. Никаких различий в скорости роста или урожайности не наблюдалось во время роста в средах BHI и BHI с добавлением ванкомицина (см.рис.S1 в дополнительном материале), а МПК ванкомицина для двух штаммов были одинаковыми (312,5 мкг / мл). МИК H-CHG также не изменился. Затем использовали вестерн-блоттинг для определения уровней VanX в культурах E. faecium PB221, подвергнутых воздействию ванкомицина, H-CHG или воды в течение 1,5 или 2 часов (рис. 4). Эти временные точки были выбраны для обеспечения трансляции белков Van после воздействия индуктора промотора. Репрезентативный вестерн-блот показан на фиг. 4A; белок VanX-His ₆ массой 23 кДа показан стрелкой.Средние значения интенсивности полосы VanX (интегральные значения плотности) для трех независимых экспериментов показаны на фиг. 4В. Результаты демонстрируют, что в обработанных ванкомицином и H-CHG клетках продуцируется значительно больше белка VanX, чем в контрольных клетках.

FIG 4

Обнаружение и количественная оценка уровней белка VanX в культурах E. faecium. (A) Репрезентативный вестерн-блоттинг. Всего 250 мкг белка, экстрагированного из культур E. faecium PB221, анализировали вестерн-блоттингом с антиполигистидиновым антителом, как описано в тексте.Белок массой 23 кДа (обозначен стрелкой) был обнаружен в культурах, обработанных H-CHG и ванкомицином. Дорожки: 1 — контрольные клетки через 1,5 ч инкубации; 2 — контрольные клетки через 2 ч инкубации; 3 — клетки после 1,5 ч инкубации с 1/4 × MIC H-CHG; 4 — клетки после 2 ч инкубации с 1/4 × MIC H-CHG; 5 — клетки после 1,5 ч инкубации с 1/2 × MIC H-CHG; 6 — клетки после 2 ч инкубации с 1/2 × MIC H-CHG; 7 — клетки после 1,5 ч инкубации с 1 × MIC H-CHG; 8 — клетки после 2 ч инкубации с 1 × MIC H-CHG; 9 — клетки после 2 ч инкубации с 20 мкг / мл ванкомицина. (B) Количественная оценка уровней белка VanX. Количество белка VanX определяли количественно путем вычисления IDV (интегрированного значения плотности) каждой полосы белка с помощью инструмента для определения плотности пятна Alphaimager. Показаны средние значения. Планка погрешностей представляет собой стандартные отклонения от 3 экспериментов. Для оценки значимости использовался односторонний критерий Стьюдента t . *, P <0,05.

Для индукции промотора vanHAX с помощью H-CHG необходим VanR в системе гетерологической экспрессии B. subtilis.Для дальнейшего расширения исследования индукции генов устойчивости к ванкомицину с помощью H-CHG мы использовали ранее разработанную промоторную репортерную систему vanH в B. subtilis 168 (34). В штамме BAU-101 промотор vanH из VRE E. faecium A624 VanA слит с lacZ и хромосомно интегрирован. Производные этого штамма экспрессируют плазмидные гены vanR и / или vanS (таблица 1). Если соединение является индуктором промотора vanH , в присутствии хромогенного индикатора активности β-галактозидазы вокруг зоны ингибирования будет наблюдаться синий ореол.

Мы использовали серию репортерных штаммов B. subtilis BAU для оценки активности промотора vanH в ответ на ванкомицин (положительный контроль), канамицин или воду (отрицательный контроль) и H-CHG (таблица 3; см. Также рис. S2 в дополнительный материал). Для репортерных штаммов BAU-102 и BAU-103, которые экспрессируют vanRS или vanR , соответственно, наблюдались синие ореолы вокруг зон ингибирования H-CHG и ванкомицина. Слабые синие ореолы, наблюдаемые вокруг зон ингибирования H-CHG и ванкомицина для штамма BAU-103, могут быть результатом перекрестных помех между VanR и гетерологичными двухкомпонентными мембранными сенсорами и / или эффектами дозировки гена при экспрессии vanR из многокопийной плазмиды.

ТАБЛИЦА 3 Результаты по репортерному штамму Bacillus subtilis

Серию репортерного штамма B. subtilis BAU также использовали для определения специфического компонента H-CHG, ответственного за индукцию промотора vanH (таблица 3; см. Также фиг. S2). Раствор, содержащий хлоргексидин (хлоргексидиндиацетат) и отдельные компоненты антисептика H-CHG (порошкообразный хлоргексидин, изопропиловый спирт и соль d-глюконата натрия) были протестированы на способность вызывать образование синего ореола в репортерных штаммах BAU-102 и BAU. -103.H-CHG, порошкообразный хлоргексидин и диацетат хлоргексидина были единственными протестированными веществами, которые индуцировали промотор vanH .

Индукция vanA с помощью H-CHG зависит от VanR. Чтобы подтвердить, что индукция генов устойчивости к ванкомицину с помощью H-CHG зависит от VanR, мы сконструировали делеционные мутанты E. faecium 1,231,410 vanR и vanRS . Поскольку только делеция vanS приводит к конститутивной экспрессии устойчивости к ванкомицину (60), вклад VanR в мутант с делецией VanS не оценивался.МИК ванкомицина для мутантов Δ vanR и Δ vanRS были снижены по сравнению с таковыми для E. faecium 1,231,410 дикого типа (2,4 мкг / мл против 312,5 мкг / мл), но МПК для H-CHG не изменилась.

RT-qPCR использовали для оценки экспрессии vanA в культурах, обработанных ванкомицином в течение 2 часов (фиг. 5A) или 1 × MIC H-CHG в течение 15 минут (фиг. 5B). Как и ожидалось, экспрессия vanA была снижена в мутантах Δ vanR и Δ vanRS по сравнению со штаммом дикого типа для культур, обработанных как ванкомицином, так и H-CHG.Для фиг. 5A различие в экспрессии vanA , наблюдаемое между штаммами Δ vanR и Δ vanRS , предполагает, что VanS играет некоторую роль в активации экспрессии vanA в отсутствие VanR. Однако этот паттерн экспрессии гена не приводит к устойчивости к ванкомицину, поскольку, как отмечалось выше, мутанты Δ vanR и Δ vanRS имеют идентичные значения MIC ванкомицина. Из результатов, показанных на фиг. 5B, мы заключаем, что индукция H-CHG vanA зависит от VanR.Кроме того, поскольку на MIC H-CHG не влияет делеция vanR или vanRS , индукция генов устойчивости к ванкомицину VanA-типа не защищает от H-CHG.

ФИГ. 5. Анализ

RT-qPCR экспрессии гена vanA в ответ на ванкомицин и H-CHG. RT-qPCR использовали для количественной оценки экспрессии лигазы vanA после воздействия ванкомицина (50 мкг / мл) в течение 2 часов (A) и 1 × MIC H-CHG в течение 15 минут (B) по сравнению с культурами, не подвергавшимися воздействию, для E. faecium 410 дикого типа и мутанты с делецией Δ vanR и Δ vanRS .Экспрессия гена vanA была внутренне нормализована до clpX . Экспрессия vanA в контрольных культурах была установлена ​​равной 1 (не показано), и была произведена количественная оценка относительной кратности экспрессии в обработанных ванкомицином и H-CHG культурах из двух независимых экспериментов (испытание 1, красные столбцы; испытание 2, зеленые столбцы). .

E. faecalis HIP11704 повторно чувствителен к цефтриаксону в присутствии хлоргексидина с суб-МПК. Энтерококки по своей природе устойчивы к большинству цефалоспоринов, которые являются β-лактамными антибиотиками.β-лактамные антибиотики ингибируют биосинтез клеточной стенки за счет связывания с пенициллин-связывающими белками (PBP), которые перекрестно связывают предшественники пептидогликана (61). Механизм устойчивости энтерококков к цефалоспорину является многофакторным и изучен не полностью, но при этом участвует производство PBP5, который имеет низкое сродство к β-лактамам (61). Предыдущие исследования устойчивых к ванкомицину энтерококков показали синергизм между β-лактамами и ванкомицином (62–65). Для этого синергизма необходима индукция генов устойчивости к ванкомицину, приводящая к экспрессии карбоксипептидазы и гидролизу d-Ala – d-Ala концов из предшественников пептидогликана (64). В этом исследовании мы показали, что H-CHG индуцирует экспрессию гена устойчивости к ванкомицину у E. faecium и E. faecalis типа VanA (рис. 2). Следовательно, ожидаемым фенотипом VRE, обработанного H-CHG, является повышенная чувствительность к цефалоспоринам.

Мы проверили E. faecium 1,231,410 и E. faecalis HIP11704 VanA-типа на синергизм с цефтриаксоном, цефалоспорином широкого спектра действия, с использованием анализа микроразбавления в бульоне (таблица 4). Интересно, что снижение МПК цефтриаксона (с 500 мкг / мл до 2 мкг / мл) наблюдалось для E.faecalis HIP11704 в присутствии субингибиторного H-CHG или CHG, демонстрируя синергизм между хлоргексидином и цефтриаксоном. Как и ожидалось (64), ванкомицин также индуцировал чувствительность к цефтриаксону у E. faecalis HIP11704.

ТАБЛИЦА 4

МИК цефтриаксона для VRE типа VanA

МИК цефтриаксона была значительно выше для E. faecium 1 231 410, чем для E. faecalis HIP11704. Как отмечалось ранее (66), E. faecium 1,231,410 имеет повышенную MIC ампициллина (> 4 мкг / мл), что может быть связано с вариациями последовательностей в pbp5 и других, еще не идентифицированных локусах.Хотя МПК цефтриаксона действительно снижалась для E. faecium 1,231,410 в присутствии ванкомицина или H-CHG (таблица 4), степень снижения, вероятно, не имеет большого клинического значения.

E. faecium 1,231,410 более чувствителен к ванкомицину в присутствии хлоргексидина с суб-МИК. Мы провели второй набор анализов синергии, чтобы оценить, могут ли ванкомицин и H-CHG действовать аддитивно, повышая устойчивость к ванкомицину у E. faecium 1,231,410. Неожиданно штамм стал более чувствительным к ванкомицину в присутствии суб-MIC H-CHG (таблица 5).Снижение МИК ванкомицина аналогичной величины не наблюдалось для мутанта E. faecium 1,231,410 Δ vanR . Этот результат указывает на то, что активация генов устойчивости к ванкомицину необходима для сенсибилизации ванкомицина в присутствии хлоргексидина.

ТАБЛИЦА 5

МИК ванкомицина для E. faecium 1,231,410

ОБСУЖДЕНИЕ

Целью данного исследования было изучить транскрипционные ответы E. faecium 1,231,410, клинического изолята, устойчивого к ванкомицину, на уровни МИК потребительского продукта, содержащего ХГГ. (H-CHG).Среди генов с высокой активностью после 15 мин воздействия продукта был кластер генов устойчивости к ванкомицину VanA-типа. Из-за клинической значимости устойчивости к ванкомицину остальная часть текущего исследования была сосредоточена на этом аспекте транскрипционного ответа E. faecium 1,231,410. Однако другие известные гены были индуцированы воздействием H-CHG. К ним относятся liaXYZ , которые связаны с нечувствительностью энтерококков к даптомицину (41–44), а также другие гены, связанные с экстрацитоплазматическим стрессом.Предположительно, эти гены активируются в ответ на стресс клеточной поверхности, вызванный хлоргексидином. Другие гены с высокой активностью включают предсказанные системы транспорта металлов и предсказанные транспортные системы ABC с неизвестной функцией, которые, по-видимому, кодируются мобильным генетическим элементом. Конкретные роли этих транспортных систем в ответе на стресс H-CHG еще предстоит определить; Возможные варианты включают отток хлоргексидина (обратите внимание, что новое семейство белков оттока хлоргексидина было недавно идентифицировано для грамотрицательных бактерий [67, 68]), транспорт металлов для поддержания окислительно-восстановительного баланса в клетке или транспорт метаболитов, связанных с клеточной стенкой.В будущих исследованиях будет сравниваться транскриптомный ответ E. faecium на H-CHG с ответом на CHG и глюконат натрия, что поможет определить, какие конкретные компоненты H-CHG ответственны за наблюдаемые изменения транскрипции.

Мы наблюдали, что уровни MIC и суб-MIC H-CHG индуцировали экспрессию кластера генов устойчивости к ванкомицину VanA-типа в E. faecium 1,231,410. Индукция vanA с помощью H-CHG произошла в E. faecalis и E. faecium VanA-типа, но vanB не индуцировалась H-CHG у VanB-типа E. faecalis и E. faecium. Используя репортер промотора vanH , мы определили, что воздействие H-CHG приводит к увеличению активности промотора vanH . Производное E. faecium 1,231,410, экспрессирующее белок VanX, меченный гексагистидином, использовали в экспериментах по вестерн-блоттингу, чтобы показать, что повышенная активность промотора vanH с H-CHG приводит к значительному увеличению уровней белка VanX. Используя комбинацию подходов в E. faecium 1,231,410 и гетерологичном хозяине B.subtilis, мы определили, что VanR необходим для индукции vanHAX с помощью H-CHG. Эксперименты с B. subtilis показали, что хлоргексидин является специфическим компонентом H-CHG, ответственным за индукцию промотора vanH . Важно отметить, что экспрессия генов устойчивости к ванкомицину не защищает от хлоргексидина, поскольку на MIC H-CHG не влияет делеция vanR или vanRS .

В совокупности наши результаты показывают, что двухкомпонентная система VanRS воспринимает либо хлоргексидин, либо хлоргексидин-индуцированный стресс клеточной поверхности и активирует экспрессию vanHAX .Индукция генов устойчивости к ванкомицину VanA-типа другими соединениями, кроме ванкомицина, хорошо изучена, хотя и с противоречивыми результатами (34, 55, 56, 69, 70). Эти противоречивые результаты могут быть приписаны различным методам, используемым для оценки индукции (плазмиды многокопийной экспрессии, экспрессия генов и вне или внутри их естественного контекста, фенотип устойчивости и ферментативная активность VanX). По этой причине мы попытались использовать несколько подходов, чтобы продемонстрировать, что хлоргексидин является индуктором устойчивости к ванкомицину типа VanA.Несмотря на отмеченные выше противоречия, существует консенсус в отношении того, что ванкомицин, тейкопланин и моеномицин являются индукторами устойчивости к ванкомицину типа VanA, в то время как только ванкомицин является индуктором устойчивости типа VanB. Для устойчивости к ванкомицину VanB-типа (чувствительной только к ванкомицину) прямое связывание ванкомицина с датчиком VanS было экспериментально продемонстрировано для хозяина Streptomyces (71). Для устойчивости к ванкомицину VanA-типа была предложена альтернативная модель для объяснения ослабленной специфичности индукции по сравнению с устойчивостью VanB-типа.Эта модель утверждает, что белок VanS типа VanA реагирует на дестабилизацию клеточной поверхности и, в частности, на ингибирование трансгликозилирования (56, 69). Эта модель подтверждается наблюдением, что структурно не связанные классы лекарств активируют экспрессию резистентности типа VanA, включая гликопептиды, моеномицин, а теперь и хлоргексидин. Дальнейшие исследования необходимы для выяснения специфического аспекта стресса, вызванного хлоргексидином или хлоргексидином, который приводит к индукции резистентности типа VanA.

Как и ожидалось для VRE, активно экспрессирующего устойчивость к ванкомицину (64), VRE типа VanA были более чувствительны к цефтриаксону в присутствии субингибиторного ХГЧ. Величина этого эффекта была невелика для E. faecium 1,231,410, который имеет повышенные МПК цефтриаксона (таблица 4) и ампициллина (66). Неожиданно суб-MIC H-CHG увеличил чувствительность E. faecium 1,231,410 к ванкомицину, но аналогичное увеличение чувствительности к ванкомицину не наблюдалось для производного vanR Δ (таблица 5).Это предполагает, что этот эффект зависит от экспрессии генов устойчивости к ванкомицину. Мы определили два объяснения чувствительности E. faecium 1,231,410 к ванкомицину в присутствии как ванкомицина, так и хлоргексидина. Первое объяснение состоит в том, что в присутствии ванкомицина и хлоргексидина E. faecium 1,231,410 синтезирует предшественники пептидогликана, которые не заканчиваются ни в d-Ala-d-Ala (синтезируется Ddl), ни в d-Ala-d-Lac (синтезируется VanA). . Вместо этого предшественники, которые заканчиваются структурой, чувствительной к связыванию ванкомицина, синтезируются VanA. Механизмом, лежащим в основе этого, может быть ослабленная субстратная специфичность лигазы VanA (72, 73) в сочетании с хлоргексидин-зависимыми изменениями экспрессии генов, которые изменяют пулы субстратов и приводят к включению аминокислот или коротких кислот, которые ослабляют клеточную стенку, как это было ранее. сообщалось ранее (74). Основываясь на анализе предсказанных аминокислотных рацемаз и d-изомер-специфичных дегидрогеназ (см. Набор данных S2 в дополнительном материале), эта гипотеза не подтверждается нашими данными секвенирования РНК.Альтернативное объяснение состоит в том, что в присутствии ванкомицина и хлоргексидина E. faecium 1,231,410 синтезирует предшественники пептидогликана, которые, как и ожидалось, заканчиваются на d-Ala – d-Lac. Однако эти концы не могут быть сшиты из-за индуцированных хлоргексидином изменений экспрессии транспептидазы. Несмотря на то, что наш порог изменения в ≥10 раз, использованный в этом исследовании, не был достигнут, некоторые транспептидазы (кодируемые pbpF , ddcP и pbpA ) активируются после 15 минут воздействия хлоргексидина (см. Набор данных S2).Эти данные предполагают, что соотношение транспептидаз изменяется в присутствии хлоргексидина, что подтверждает вторую гипотезу. Анализ структуры пептидогликана E. faecium 1,231,410 представляет интерес для будущей работы, как и делеция pbpF , ddcP и pbpA для оценки их роли в сенсибилизации ванкомицином, которую мы наблюдаем для E. faecium 1,231,410 в присутствии хлоргексидин. Понимание этого механизма может быть полезным для новых стратегий лечения инфекций VREfm.

Каковы возможные клинические последствия воздействия VRE хлоргексидина с суб-МПК? Основываясь на наших результатах, изоляты E. faecium и E. faecalis, несущие гены устойчивости к VanA-типу, будут синтезировать модифицированные клеточные стенки в ответ на суббактерицидные уровни хлоргексидина. Гликопептид-зависимые VRE были выделены у пациентов, проходящих терапию ванкомицином (5). Эти изоляты имеют мутации в ddl и зависят от экзогенного присутствия ванкомицина, индуцирующего vanA или vanB , так что может образовываться клеточная стенка (75).Было бы интересно исследовать, может ли воздействие хлоргексидина с суб-МПК спасти VRE, зависящую от гликопептида VanA-типа. Также важно, что гены, защищающие от даптомицина ( liaXYZ ), сильно активируются в ответ на хлоргексидин. Недавно было продемонстрировано, что делеция liaR , кодирующего активатор экспрессии liaXYZ (45), восстанавливает чувствительность даптомицина к нечувствительным к даптомицину энтерококкам (76). Потребуются дальнейшие исследования, чтобы определить, влияет ли «праймирование» гена хлоргексидином на результаты лечения даптомицином, или частое воздействие субингибирующего хлоргексидина является селективным для штаммов, которые конститутивно активируют liaXYZ .

Аллергия на хлоргексидин — Австралазийское общество клинической иммунологии и аллергии (ASCIA)

Эта информация была подготовлена ​​ASCIA совместно с ANZAAG, Австралийско-новозеландской группой по анестезиологической аллергии.

Хлоргексидин — высокоэффективное антисептическое средство. Аллергические реакции на хлоргексидин возникают редко, но они учащаются, что, возможно, связано с увеличением использования продуктов, содержащих хлоргексидин, в последние годы.

ASCIA PCC Аллергия на хлоргексидин 2019 151,05 KB

Хлоргексидин используется в большом количестве продуктов, и его присутствие иногда может быть «скрытым»

За последние пару десятилетий резко увеличилось количество продуктов, содержащих хлоргексидин, в больницах и общинах. Поскольку устойчивые к антибиотикам организмы становятся все более распространенными, его использование как для профилактики, так и для лечения инфекции, вероятно, будет продолжаться.

В условиях больницы хлоргексидин обычно используется для мытья рук и для очистки кожи перед хирургической процедурой или введением иглы.Некоторые хирургические повязки, медицинские устройства (например, центральные венозные магистрали) и лубриканты также содержат хлоргексидин, чтобы снизить риск заражения. Многие безрецептурные продукты содержат хлоргексидин. В таблице на странице 3 перечислены некоторые продукты, которые могут содержать хлоргексидин. Обратите внимание, что этот список не является исчерпывающим. Часто выпускаются новые продукты, содержащие хлоргексидин, поэтому важно внимательно прочитать все этикетки перед использованием, чтобы проверить состав продуктов

Если у вас аллергия на хлоргексидин, вы должны знать, что присутствие хлоргексидина часто не является очевидным.Маркировка может быть непоследовательной. Не существует универсального символа, указывающего на то, что продукт содержит хлоргексидин. Его можно описать, используя полное слово «хлоргексидин», а иногда и аббревиатуру (например, CHG в повязках или AGB на центральных венозных линиях). Если вы не уверены, попросите своего фармацевта помочь убедиться, что препараты, отпускаемые без рецепта, не содержат хлоргексидин, поскольку этикетки могут быть трудночитаемыми, и их нельзя размещать на видном месте.

Поскольку хлоргексидин может быть «скрытым», например, в качестве покрывающего агента на медицинских устройствах, таких как центральные венозные сосуды, диагностировать аллергические реакции бывает сложно.У людей, страдающих аллергией на хлоргексидин, часто бывает более одной реакции из-за неправильного диагноза или случайного повторного воздействия, вызванного неадекватной маркировкой или неадекватной осведомленностью.

Непосредственные аллергические реакции на хлоргексидин могут быть тяжелыми

Немедленные аллергические реакции (также известные как реакции типа 1 или IgE) являются наиболее серьезными побочными реакциями на хлоргексидин. У людей с непосредственной аллергией на хлоргексидин контакт с хлоргексидином приводит к активации иммунных клеток и высвобождению гистамина в ткани. Это может привести к появлению ряда симптомов, включая зуд, крапивницу (крапивницу) и ангионевротический отек (отек).

Тяжелые аллергические реакции (анафилаксия) могут привести к затрудненному дыханию, головокружению, падению артериального давления и коллапсу. Анафилаксия обычно возникает, когда хлоргексидин контактирует с внутренними (слизистыми) поверхностями или более глубокими тканями тела через отверстие в коже во время медицинской процедуры. Люди, у которых развивается анафилаксия на хлоргексидин, могут сообщать о предшествующей легкой крапивнице (крапивнице) после приема хлоргексидина.Значение этого, возможно, не было оценено. Дополнительная информация об анафилаксии доступна на сайте ASCIA: www.allergy.org.au/anaphylaxis

.

Хотя аллергия на хлоргексидин встречается редко, это общепризнанная причина анафилаксии во время операции. Наличие в анамнезе других аллергий, таких как экзема, астма или аллергический ринит (сенная лихорадка), не увеличивает риск развития аллергии на хлоргексидин.

На данный момент мы не знаем, подвергаются ли медицинские работники, часто контактирующие с хлоргексидином, повышенный риск развития аллергии на хлоргексидин.Люди с аллергией на хлоргексидин должны переносить другие антисептические продукты из-за отсутствия перекрестной реактивности.

Хлоргексидин также может вызывать раздражающий контактный дерматит или аллергический контактный дерматит

Хлоргексидин также может вызывать раздражающий дерматит. Это не настоящая аллергическая реакция, поскольку она не связана с определенным иммунным ответом. Это вызвано тем, что хлоргексидин напрямую раздражает кожу и приводит к грубой, сухой и чешуйчатой ​​коже, иногда с мокнущими язвами.Хлоргексидин также может вызывать аллергический контактный дерматит. Хотя симптомы аллергического контактного дерматита похожи на симптомы ирритантного дерматита, он включает не немедленную (не опосредованную IgE) аллергическую реакцию. Обычно это происходит через 12-48 часов после контакта с хлоргексидином.

Раздражающий дерматит и аллергический контактный дерматит на хлоргексидин раздражают, но не опасны. Однако есть сообщения о людях с аллергическим контактным дерматитом, у которых позже развиваются немедленные аллергические реакции на хлоргексидин.В обоих случаях рекомендуется распознавание, лечение и отказ от хлоргексидина.

Осведомленность и диагностика — важные первые шаги

Ваш врач сначала оценит вашу историю болезни, чтобы определить причину вашей проблемы. За этим часто следует тестирование на аллергию, чтобы подтвердить или исключить аллергию на хлоргексидин. Кожные пробы на аллергию и / или анализы крови на аллерген-специфический IgE (широко известный как RAST) часто используются для подтверждения или исключения немедленной аллергии на хлоргексидин.Другие типы кожных проб, называемые патч-тестами, могут использоваться для диагностики аллергического контактного дерматита. Дополнительная информация о тестах на аллергию доступна на сайте www.allergy.org.au/patients/allergy-testing/allergy-testing

.

Лечение аллергии на хлоргексидин требует осторожного предотвращения

Если у вас аллергия на хлоргексидин, вам следует:

• Избегайте воздействия хлоргексидина . Важно внимательно проверять этикетки, чтобы убедиться, что хлоргексидин не входит в рецептурные или безрецептурные продукты.Если вы не уверены, что продукт содержит хлоргексидин, спросите у медицинских работников, например, у фармацевтов.
• Сообщите врачам, медсестрам, дантистам и специалистам по сбору крови о вашей аллергии на хлоргексидин заблаговременно перед любыми процедурами, стоматологическим лечением, анализами крови или рентгеновскими лучами, чтобы убедиться, что хлоргексидин не используется.
• Носите браслет с медицинской идентификацией , в котором указано, что у вас аллергия на хлоргексидин. Если вы без сознания или в замешательстве и нуждаетесь в неотложной помощи, медсестры и врачи узнают, что следует избегать хлоргексидина. Это особенно важно, поскольку хлоргексидин часто используется в качестве антисептика при медицинских процедурах.
• Обсудите план действий в чрезвычайной ситуации (план действий ASCIA при аллергических реакциях или план действий ASCIA при анафилаксии) со своим врачом. Это может включать обучение использованию автоинжектора адреналина (адреналина) (например, EpiPen ^® ), который может быть назначен вашим врачом, если это необходимо.

В настоящее время нет доказательств того, что аллергия на хлоргексидин может исчезнуть со временем или путем избегания.Поэтому важно помнить, что прием хлоргексидина следует избегать на протяжении всей жизни.

Продукты, которые могут содержать хлоргексидин

В больницах

• Салфетки антисептические для кожи
• Гели для рук и растворы для мытья рук
• Средства для дезинфекции кожи хирургические
• Губки и салфетки перед операцией
• Спреи и растворы для очистки поверхностей
• Приготовление смазочных материалов
• Ополаскиватель для полости рта
• Центральные венозные линии
• Повязки и сетка хирургические

В настройках сообщества

• Гели для рук и моющие средства
• Ополаскиватели, зубные пасты и другие продукты для рта
• Дезинфицирующие или антисептические средства
• Шампунь, гель для душа, губки и салфетки
• Кремы, мази и очищающие средства для кожи
• Антисептические леденцы и спреи от горла
• Спреи назальные
• Косметика

© ASCIA 2019

ASCIA — это ведущая профессиональная организация специалистов по клинической иммунологии / аллергии в Австралии и Новой Зеландии.

Ресурсы

ASCIA основаны на опубликованной литературе и обзорах экспертов, однако они не предназначены для замены медицинских рекомендаций. На содержание ресурсов ASCIA не влияют никакие коммерческие организации.

Для получения дополнительной информации посетите www.allergy.org.au

Чтобы сделать пожертвование на исследования аллергии и иммунологии, перейдите на сайт www.allergyimmunology.org.au/donate

Обновлено апрель 2019 г.

Очищение хлоргексидин-глюконатом для предотвращения инфекции кровотока, связанной с центральной линией, и приобретения микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью у молодых пациентов с раком или перенесших трансплантацию донорских стволовых клеток — просмотр полного текста

Комплексный онкологический центр города Надежды
Дуарте, Калифорния, США,
Детская и женская больница Миллера Лонг-Бич
Лонг-Бич, Калифорния, США,
Детская больница Лос-Анджелеса
Лос-Анджелес, Калифорния, США,
Детская больница Вэлли
Мадера, Калифорния, США, 93636
Детская больница и исследовательский центр в Окленде
Окленд, Калифорния, США, 94609-1809
Детская больница округа Ориндж
Оранж, Калифорния, США, 92868
UCSF Medical Center-Parnassus
Сан-Франциско, Калифорния, США, 94143
Медицинский центр UCSF — Mission Bay
Сан-Франциско, Калифорния, США, 94158
Институт биомедицинских инноваций Лундквиста в Медицинском центре Харбор-Калифорнийский университет
Торранс, Калифорния, США,
Детский медицинский центр Коннектикута
Хартфорд, Коннектикут, США, 06106
Йельский университет
Нью-Хейвен, Коннектикут, США, 06520
Детская больница Альфреда Дюпон
Уилмингтон, Делавэр, США, 19803
Детский национальный медицинский центр
Вашингтон, округ Колумбия, США, 20010
Детская клиника Немур — Джексонвилл
Джексонвилл, Флорида, США, 32207
Детская больница Немур
Орландо, Флорида, США, 32827
Детская клиника Немур — Пенсакола
Пенсакола, Флорида, США, 32504
Детская больница Джона Хопкинса
Санкт-Петербург, Флорида, США, 33701
Общая больница Тампы
Тампа, Флорида, США, 33606
Детское здравоохранение Атланты — Эглстон
Атланта, Джорджия, США, 30322
Иллинойсский университет
Чикаго, Иллинойс, США, 60612
Детская больница Новый Орлеан
Новый Орлеан, Луизиана, США, 70118
Ochsner Medical Center Jefferson
Новый Орлеан, Луизиана, США, 70121
Восточный медицинский центр штата Мэн
Бангор, Мэн, США, 04401
Синайская больница в Балтиморе
Балтимор, Мэриленд, США, 21215
Университет Джона Хопкинса / Онкологический центр Сидни Киммела
Балтимор, Мэриленд, США, 21287
Институт рака Дана-Фарбер
Бостон, Массачусетс, США, 02215
Государственный университет Уэйна / Институт рака Карманоса
Детройт, Мичиган, США, 48201
Детские больницы и клиники милосердия
Канзас-Сити, Миссури, США, 64108
Медицинский факультет Вашингтонского университета
Сент-Луис, штат Миссури, США, 63110
Медицинский центр Университета Хакенсак
Hackensack, New Jersey, United States, 07601
Медицинский центр Монтефиоре — Moses Campus
Бронкс, Нью-Йорк, США, 10467
Детский медицинский центр Стивена и Александры Коэн в Нью-Йорке
Нью-Гайд-Парк, Нью-Йорк, США, 11040
Нью-Йорк / Медицинский центр Колумбийского университета / Комплексный онкологический центр Герберта Ирвинга
Нью-Йорк, Нью-Йорк, США, 10032
Медицинский колледж Нью-Йорка
Валгалла, Нью-Йорк, США, 10595
Университет Уэйк Форест Медицинские науки
Уинстон-Салем, Северная Каролина, США, 27157
Больница Толедо / Детская больница Толедо
Толедо, Огайо, США, 43606
Legacy Emanuel Children’s Hospital
Портленд, Орегон, США, 97227
Орегонский университет здравоохранения и науки
Портленд, Орегон, США, 97239
Медицинский центр Sanford USD — Су-Фолс
Су-Фолс, Южная Дакота, США, 57117-5134
T C Thompson Children’s Hospital
Чаттануга, Теннесси, США, 37403
St.Детская исследовательская больница Джуда,
Мемфис, Теннесси, США, 38105
Университет Вандербильта / Онкологический центр Инграма
Нашвилл, Теннесси, США, 37232
Детский медицинский центр Dell в Центральном Техасе
Остин, Техас, США, 78723
Детская больница Дрисколла
Корпус-Кристи, Техас, США, 78411
Детский медицинский центр Кука
Форт-Уэрт, Техас, США, 76104
Детская больница Сан-Антонио
Сан-Антонио, Техас, США, 78207
Методистская детская больница Южного Техаса
Сан-Антонио, Техас, США, 78229
Научный центр здоровья Техасского университета в Сан-Антонио
Сан-Антонио, Техас, США, 78229
Университет Содружества Вирджинии / Онкологический центр Мэсси
Ричмонд, Вирджиния, США, 23298
Детская больница Сиэтла
Сиэтл, Вашингтон, США, 98105
Медицинский центр Священного сердца Провиденса и детская больница
Спокан, Вашингтон, США, 99204
Медицинский центр армии Мэдигана
Такома, Вашингтон, США, 98431
Онкологический центр больницы Сент-Винсент Грин-Бэй
Грин Бэй, Висконсин, США, 54301
Детская больница
Лондон, Онтарио, Канада, N6A 5W9
Детская больница Восточного Онтарио
Оттава, Онтарио, Канада, K1H 8L1
Больница для больных детей
Торонто, Онтарио, Канада, M5G 1X8
Детская больница Монреаля при MUHC
Монреаль, Квебек, Канада, h4H 1P3
Детская больница Сан-Хорхе
Сан-Хуан, Пуэрто-Рико, 00912
Университетская педиатрическая больница
Сан-Хуан, Пуэрто-Рико, 00926

Предупреждение об использовании хлоргексидин глюконата для ухода за полостью рта: недостаточно данных

Колонизация ротоглотки — решающий шаг на пути к колонизации трахеобронхиального дерева и пневмонии у пациентов в критическом состоянии.Следовательно, обеззараживание ротоглотки [а именно антисептиками, такими как хлоргексидин глюконат (CHX)] составляет основу профилактики пневмонии. Однако большой объем данных относительно его эффективности с точки зрения снижения заболеваемости пневмонией неубедителен. Многочисленные метаанализы по-разному исследовали существующие исследования и привели к противоположным выводам. Более поздние исследования были более последовательными в обнаружении того, что благоприятные эффекты CHX были ограничены хирургическими пациентами и с более высокими концентрациями CHX [1, 2].Несмотря на эти противоречивые данные и слабую доказательную базу, использование CHX широко используется во внутрибольничной помощи для предотвращения респираторных инфекций.

Если кто-то желает продолжить использование CHX для ухода за полостью рта и расширить его за пределы связанной с вентилятором пневмонии (например, для предотвращения послеоперационных респираторных осложнений), необходимо дать ответ на вопрос об эффективности CHX в интенсивной терапии. параметр. А если ответ неясен, то следует ответить и на вопрос о его потенциальном вреде.

Хотя CHX десятилетиями успешно использовался для лечения заболеваний пародонта, как упоминалось выше, более поздние метаанализы поставили под сомнение его эффективность в предотвращении ВАП у пациентов в критическом состоянии, а именно у пациентов, находящихся на ИВЛ более 48 часов и в течение длительного периода времени. медицинская (в отличие от хирургической) причина. Удивительно, но количество метаанализов по этому вопросу превзошло количество углубленных, прикроватных, исследований, оценивающих микробную эффективность CHX. Как следствие, такие основные вопросы, как изменения со временем бактериальных популяций в ротоглотке у пациента, находящегося на ИВЛ, после полоскания рта CHX и какова остаточная концентрация CHX, остаются без ответа.Следовательно, эффективность CHX может быть поставлена ​​под сомнение, потому что его недостаточно и / или потому что бактерии стали менее восприимчивыми к CHX. Последнее является поводом для беспокойства как вне поля зрения пациентов, находящихся на ИВЛ [3], так и внутри. Сообщалось о снижении чувствительности к CHX, которое затронуло четверть бактериальных изолятов, вызывающих пневмонию у пациентов в ОИТ [4]. Кроме того, кажется, существует взаимосвязь между устойчивостью к антибиотикам и устойчивостью к CHX. Поскольку патогены, ответственные за VAP, становятся все более устойчивыми, следует ожидать, что CHX будет поражен аналогичным образом.

Второй вопрос касается как «местного», так и «системного» вреда. На местном уровне у нас есть четкие доказательства того, что использование CHX может привести к изъязвлениям слизистой оболочки, и что чем выше концентрация CHX, тем хуже переносимость пациентами [5, 6]. Что касается более системного вреда, гипотеза была впервые выдвинута Klompas et al. [2]. Они обнаружили связь между использованием CHX и повышенной смертностью у пациентов, не перенесших кардиохирургические операции. Хотя связь не была значительной, они полагали, что из-за «потенциальной важности [их] наблюдения для общественного здравоохранения» их выводы требуют тщательного рассмотрения и дальнейшей оценки.

В этом выпуске журнала Intensive Care Medicine , Deschepper et al. стремились дать такую ​​оценку [7]. Анализируя данные более 80 000 пациентов, из которых более 11 000 (14%) получали уход за полостью рта с CHX, они обнаружили, что воздействие CHX на низком уровне (≤ 300 мг) было связано с повышенным риском смерти (OR 2,61). Эта ассоциация была сильнее среди пациентов с изначально более низким риском смерти. Неожиданно такой сигнал не был обнаружен у пациентов, получавших ИВЛ.Кроме того, среди пациентов, перенесших серьезные кардиоторакальные или сосудистые операции, а также среди пациентов, получающих искусственную вентиляцию легких, CHX не влиял на смертность.

Эти результаты провокационны и противоречат здравому смыслу. Они провокационны, потому что, как упоминалось выше, CHX десятилетиями использовался в области пародонтологии, и потому что у многих из нас в шкафу в ванной есть раствор для полоскания рта на основе хлоргексидина, который мы используем более или менее часто. Осознание того, что такой повсеместный продукт может быть вредным, пугает.

Они также противоречат здравому смыслу, потому что, если CHX действительно вреден, можно было бы ожидать совершенно противоположных результатов, т. Е. Более хрупкие пациенты, пациенты с более высоким риском смерти (очевидно, включая тех, кто находится на ИВЛ), будут подвергаться неблагоприятному воздействию CHX. .

Другая важная проблема, касающаяся влияния CHX на исход, связана с общим воздействием CHX (время и количество). Хотя авторы пытаются установить пороговое значение 300 мг для определения уровней воздействия, взаимодействия между LOS пациентов, увеличение риска внутрибольничных инфекций, более высокие уровни воздействия потенциально токсичного вещества и соблюдение мер профилактики, безусловно, не являются линейными, и влияние CHX на результат должным образом не скорректировано по всем этим аспектам.Однако отсутствие надлежащей корректировки воздействия является серьезным недостатком большинства исследований по профилактике госпитальных инфекций и не позволяет правильно интерпретировать результаты этого исследования. Влияние различных концентраций CHX в этом исследовании не рассматривалось, поэтому необходимы дальнейшие исследования для оценки этого потенциального фактора, влияющего на риск токсичности. Отсутствие подробной микробиологической оценки эффектов CHX также ограничивает полное понимание исследования.

На сегодняшний день несколько ключей к разгадке потенциального вреда CHX совпадают с прямой токсичностью для легких [8,9,10], как показано на животных моделях, где введение CHX в легкие вызывает повреждение.В настоящем исследовании гипотеза о микроабсорбции CHX и прямой легочной токсичности, согласно результатам, не соответствует действительности. Действительно, пациенты со спонтанным дыханием, с активным глотанием и кашлем, следовательно, наименее подверженные риску микроабсорбции пациенты имеют повышенную смертность после воздействия CHX, тогда как пациенты с наибольшим риском микровакуумной аспирации — те, которые седативные, иногда парализованные, находящиеся на ИВЛ, не подвержены воздействию CHX.Возможность того, что результаты могут быть связаны с неустановленными предубеждениями и смешивающими эффектами, остается.

Итак, что мы будем делать дальше? Учитывая неопределенность в отношении эффективности CHX (как с точки зрения обеззараживания ротоглотки, так и снижения VAP), изменения восприимчивости патогенов к CHX и потенциальный вред, связанный с воздействием CHX, как интригующе сообщили Deschepper et al. [7], срочно необходимы дополнительные данные, чтобы направлять наши превентивные стратегии и определять конкретные группы, которым может быть полезен CHX, и избежать нанесения вреда тем, кто этого не сделает.

Ссылки

1. 1.

   Лабо С.О., Ван де Вайвер К., Брюсселаерс Н. и др. (2011) Профилактика вентилятор-ассоциированной пневмонии с помощью пероральных антисептиков: систематический обзор и метаанализ. Lancet Infect Dis 11: 845–854

   Статья PubMed CAS Google Scholar

2. 2.

   Klompas M, Speck K, Howell MD, Greene LR, Berenholtz SM (2014) Переоценка рутинного ухода за полостью рта с хлоргексидина глюконатом для пациентов, получающих искусственную вентиляцию легких: систематический обзор и метаанализ.JAMA Intern Med 174: 751–761

   Статья PubMed CAS Google Scholar

3. 3.

   McNeil JC, Hulten KG, Kaplan SL, Mahoney DH, Mason EO (2013) Инфекции Staphylococcus aureus у педиатрических онкологических пациентов: высокие показатели устойчивости к противомикробным препаратам, антисептической толерантности и осложнений. Pediatr Infect Dis J 32: 124–128

   Статья PubMed Google Scholar

4. 4.

   La Combe B, Bleibtreu A, Messika J et al (2018) Сниженная чувствительность к хлоргексидину затрагивает четверть из изолятов Escherichia coli , ответственных за пневмонию у пациентов в отделении интенсивной терапии. Intensive Care Med. https://doi.org/10.1007/s00134-018-5061-8

   PubMed Статья Google Scholar

5. 5.

   Скоглунд Л.А., Холст Э. (1982) Десквамативные реакции слизистой оболочки, вызванные хлоргексидин глюконатом. Отчет о 3 случаях.Int J Oral Surg 11: 380–382

   Статья PubMed CAS Google Scholar

6. 6.

   Plantinga NL, Wittekamp BHJ, Leleu K et al (2016) Неблагоприятные события на слизистую оболочку полости рта при применении 2% жидкости для полоскания рта хлоргексидином в отделениях интенсивной терапии. Intensive Care Med 42: 620–621

   Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

7. 7.

   Deschepper M, Waegeman W, Eeckloo K, Vogelaers D, Blot S (2018) Влияние ухода за полостью рта с использованием хлоргексидин глюконата на больничную смертность: обсервационное когортное исследование в масштабах всей больницы.Intensive Care Med. https://doi.org/10.1007/s00134-018-5171-3

   PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

8. 8.

   Хирата К., Курокава А. (2002) Прием хлоргексидина глюконата приводит к фатальному респираторному дистресс-синдрому. Vet Hum Toxicol 44: 89–91

   PubMed Google Scholar

9. 9.

   Орито К., Хашида М., Хирата К., Курокава А., Шираи М., Акахори Ф. (2006) Влияние однократного интратрахеального воздействия хлоргексидин глюконата на легкие крысы.Drug Chem Toxicol 29: 1–9

   Статья PubMed CAS Google Scholar

10. 10.

    Xue Y, Zhang S, Yang Y, Lu M, Wang Y, Zhang T, Tang M, Takeshita H (2011) Острые легочные токсические эффекты хлоргексидина (CHX) после интратрахеальной инстилляции крысам. Hum Exp Toxicol 30: 1795–1803

    Статья PubMed CAS Google Scholar

Загрузить ссылки

Информация об авторе

Принадлежности

1. Service de Réanimation Médico-Chirurgicale, Médecine Intensive et Réanimation, Hôpital Louis Mourier, AP-HP, 92700, Paris, Colombes

2. UMR 1137, IAME, INSERM, Париж, Франция

   Jean-Damien Ricard

3. UMR 1137, IAME, Université Paris Diderot, Sorbonne Paris Cité, Paris, France

   Jean-Damien Ricard

   ⁸⁴
4. Отделение интенсивной терапии и Комитет по инфекционному контролю, Hospital de Clinicas de Porto Alegre, Rua Ramiro Barcelos, 2350, Porto Alegre, CEP
   -903, Brazil

   Thiago Lisboa

5. Programa de Pos-Graduacao em Ciencias Pneumologicas do Universidade Риу-Гранди-ду-Сул — UFRGS, Порту-Алегри, Бразилия

   Thiago Lisboa

6. Rede Institucional de Pesquisa e Inovacao em Medicina Intensiva, Санта-Каса-де-Мизерикордиа-де-Порту-Алегри, Порту-Алегри, Бразилия

   Тьяго Лисбоа

Авторы для переписки

Для корреспонденции Жан-Дамьен Рикар или Тьяго Лиссабон.